2013 Fiscal Year Research-status Report
LEMD3異常から結合織の増生に至る新しい分子機構の解明
| Project/Area Number |
25860928
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
|
| Research Institution | Hirosaki University |
|---|
Principal Investigator |
是川 あゆ美 弘前大学, 医学部附属病院, 助教 (70436020)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | 遺伝子 / 真皮 / コラーゲン / 結合組織 / 母斑 |
|---|
| Research Abstract |
Buschke-Ollendorff 症候群は常染色体性優性を示し，臨床的には皮膚の結合織母斑と長管骨の骨斑紋症を特徴とする。本症の原因遺伝子はLEMD3遺伝子であり，一方のアリルのloss-of- function変異で生じる。しかしながら，臨床症状は多彩で，皮膚の結合織母斑のみ，骨の骨斑紋症のみのこともあるし，家系内で同じ変異を持ちながら発症しない症例もあり，正常のアリルのLEMD3遺伝子発現の個人差や組織での違いによるものと推測されている。本研究の目的は、LEMD3のloss-of- function変異により結合織の増生機構解明、ならびに結合織増生皮膚疾患でのLEMD3異常の検索である．本年度は，正常線維芽細胞でのLEMD3遺伝子の強制発現を行った．LEMD3のcDNAを構築し、ベクターに挿入し発現ベクターを構築した．線維芽細胞に通常の発現ベクターを一時的に導入し、ファイブロネクチン、メタロプロテネース群、I、III型コラーゲン、エラスチンなどの結合織に関連する遺伝子発現の抑制をRT-PCRやウエスタンブロットで検討した．また， Buschke-Ollendorff 症候群患者の遺伝子変異検索と資料の保存も検討した．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
正常線維芽細胞でのLEMD3遺伝子の強制発現を行った。LEMD3のcDNAを構築し、ベクターに挿入、発現ベクターを構築した。線維芽細胞に通常の発現ベクターを一時的に導入し、ファイブロネクチン、メタロプロテネース群、I、III型コラーゲン、エラスチンなどの結合織に関連する遺伝子発現の抑制をRT-PCRやウエスタンブロットで検討した。また、Buschke-Ollendorff 症候群患者の遺伝子変異検索と資料の保存も検討した。計画通りに進んでいる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
患者細胞でのLEMD3レスキュー実験
患者の結合織母斑部と正常部から線維芽細胞を採取し培養。患者線維芽細胞に遺伝子強制発現で使用した通常の発現ベクターや誘導可能な発現ベクターを導入。可能であれば、stable系も作成。その細胞株にて結合織関連の遺伝子群の発現を見る。
ヒトLEMD3遺伝子トランスジェニックマウスの作製
ヒトLEMD3遺伝子を、テトラサイクリン誘導型のプロモーターを有するトランスジェニックマウス用のベクターに組み込む。そのコンストラクトにてトランスジェニックマウスを作製。皮膚を採取して、ヒトLEMD3の発現を確認。テトラサイクリン投与での誘導も確認する。
|
