全身性強皮症における免疫抑制療法の作用機序の検討

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25860955
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 牧野 貴充 熊本大学, 生命科学研究部, 助教 (20433039)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: サイトカイン / mRNA

Research Abstract

始めに、シクロフォスファミドによる免疫抑制療法を行った難治性の全身性強皮症患者3例の血清および皮膚生検組織を使用した。これらは倫理委員会の審査を経て文章による同意を得たのち、凍結保存したものである。まず血清中のサイトカインについて、Multi-Analyte ELISArray Kit(SAbioscience)を用いて、網羅的に12-30種類のサイトカインを定量した。その結果、治療前後の比較でG-CSFの上昇、TGF-b1の持続高値を認めた。次に、皮膚組織のparaffin切片からRNeasy FFPE kit (Qiagen)を用いてtotal RNAを抽出した。病変部皮膚組織のmRNAについてPCR array (Qiagen) により全身性強皮症におけるin vivoでのサイトカインを中心に88種のmRNA発現様式を網羅的に検査した。まず、免疫抑制療法が皮膚硬化に対し有効であった群と治療抵抗性群に分け、mRNAの発現量を比較した。その結果、CTNF,IL-10, CD70, IL17Aなどのサイトカインは有効群で高値であり、BNP7, PDGFA, CSF1, BNP7などのサイトカインは治療抵抗群で高値であることがわかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

検体である、血清と皮膚組織を使用し、免疫抑制療法での前後の比較および、治療への反応性として有効群と治療抵抗群との比較ができたため。

Strategy for Future Research Activity

ELISArrayにて免疫抑制療法による有意な変化が確認されたサイトカインと、PCR arrayにて変化が確認されたmRNAの関連性について、個別に血清中の濃度やRT-PCRを調べる。さらに、サイトカインの局在を免疫染色を用いて確認する。線維芽細胞あるいは血管内皮細胞に発現しているmRNA、蛋白に注目したい。
そのようなmRNAや蛋白の中にコラーゲンを中心とした細胞外マトリックスやその代謝酵素などが含まれていた場合、それらの発現が皮膚組織中で実際に変化しているか、つまりそのmRNAが機能的であるかどうかをparaffin切片の免疫染色あるいはtotal RNAを用いたReal-time PCR法で確認する。

Research Products

• [Journal Article] MIRSNP rs2910164 of miR-146a is associated with the muscle involvement in polymyositis/dermatomyositis. (2013)
  • Author(s): Okada Y, Jinnin M, Makino T, Kajihara I, Makino K, Honda N, Nakayama W, Inoue K, Fukushima S, Ihn H.
  • Journal Title: International Journal of Dermatology Volume: 53 Pages: 300-304
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Proportion of Lymphocytic Inflammation with CD123 Positive Cells in Lupus Erythematous Profundus Predict a Clinical Response to Treatment. (2013)
  • Author(s): Miyashita A, Fukushima S, Makino T, Yoshino Y, Yamashita J, Honda N, Aoi J, Ichihara A, Jinnin M, Inoue Y, Ihn H.
  • Journal Title: Acta Dermato-Venereologica Volume: 17 Pages: in press
  • DOI: 10.2340/00015555-1777.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Serum levels of tenascin-C in collagen diseases. (2013)
  • Author(s): Inoue K, Jinnin M, Hara Y, Makino K, Kajihara I, Makino T, Sakai K, Fukushima S, Inoue Y, Ihn H.
  • Journal Title: Journal of Dermatology Volume: 40 Pages: 715-719
  • DOI: 10.1111/1345-8138.12218
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression analysis of multiple microRNAs in each patient with scleroderma. (2013)
  • Author(s): Koba S, Jinnin M, Inoue K, Nakayama W, Honda N, Makino K, Kajihara I, Makino T, Fukushima S, Ihn H.
  • Journal Title: Experimental Dermatology Volume: 22 Pages: 489-491
  • DOI: 10.1111/exd.12173.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Down-regulation of miR-223 contributes to the formation of Gottron's papules in dermatomyositis via the induction of PKCε (2013)
  • Author(s): Inoue K, Jinnin M, Yamane K, Makino T, Kajihara I, Makino K, Honda N, Nakayama W, Fukushima S, Ihn H.
  • Journal Title: European Journel of Dermatology Volume: 23 Pages: 160-167
  • DOI: 10.1684/ejd.2013.1959.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The downregulation of microRNA let-7a contributes to the excessive expression of type I collagen in systemic and localized scleroderma. (2013)
  • Author(s): Makino K, Jinnin M, Hirano A, Yamane K, Eto M, Kusano T, Honda N, Kajihara I, Makino T, Sakai K, Masuguchi S, Fukushima S, Ihn H.
  • Journal Title: Journal of Immunology Volume: 190 Pages: 3905-3915
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1200822.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Effects of Sarpogrelate hydrochloride for Raynaud’s phenomenon secondary to systemic sclerosis (2014)
  • Author(s): Takamitsu Makino, Masatoshi Jinnin, Ikkou Kajihara, Katsunari Makino, Hironobu Ihn
  • Organizer: 3rd Systemic sclerosis World Congress
  • Place of Presentation: Rome
  • Year and Date: 20140206-20140208