2013 Fiscal Year Research-status Report
deltaNp63発現誘導による新規肺扁平上皮癌モデルの確立と癌発症機序の解明
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25861248
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Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
山野 荘太郎 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80614528)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | deltaNp63 / TET/on / lung |
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| Research Abstract |
肺特異的deltaNp63 inducible (iPDN63)マウスを用いてdeltaNp63蛋白発現の予備検討試験として、iPDN63マウスに１週間のドキシサイクリン0.2%飲水投与を行い、動物を剖検後、肺の病理組織学的解析を行った。deltaNp63及びpan p63抗体を用いた免疫組織化学染色の結果、肺上皮細胞において、十分なdeltaNp63蛋白の発現が認められなかった。この結果を踏まえて、投与経路の変更を行い、ドキシサイクリンの混餌投与（自由摂取）及び腹腔内投与（2mg/mouse, 週２回）も合わせて検討を行ったが、免疫組織化学染色において十分なdeltaNp63蛋白の発現が認められなかった。これらの結果より本マウスはターゲット遺伝子の挿入部位になんらかの問題があり、deltaNp63蛋白発現を解析する上で十分なモデルでないと考えられた。現在は、iPDN63マウスの作製を再度行っている。
一方、短期間のdeltaNp63蛋白の発現を検討するための代案として、肺におけるin vivo transfectionの系を構築した。pCAG-EGFPベクターを100 ug/mouseの容量で気管内投与後、針電極を用いエレクトロポレーションを行った後、48時間後に解剖を行った。肺を摘出後実体蛍光顕微鏡下で観察した結果、肺の電極穿刺部位におけるGFP発現を認めた。さらにGFP抗体を用いた組織評価の結果、穿刺部位周囲の細気管支上皮及び肺胞上皮におけるGFP発現を認めた。現在、同方法を用いてpTRE-3G Zsgreen1-Ires-deltaNp63コンストラクトのin vivo transfectionを行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
作製したマウスにおけるdeltaNp63蛋白が十分な発現を示しておらず、現在再度マウスを作製している。
代案として、spc-rtTAマウスの肺でin vivo transfectionを行い、検討用のプラスミドの肺への発現を認めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在、再度作製したマウス約90匹からターゲットコンストラクトが導入されたマウスが3匹とれている。現在、本マウスとspc-rtTAマウスとの交配を行い、F1マウスにおけるDox投与による肺でのdeltaNp63蛋白発現の確認を行う予定である。
合わせて、新たに開発したマウス肺でのin vivo transfectionの系を用いて、マウス作製の際に使用したプラスミドを気管内投与し、肺上皮におけるdeltaNp63発現による初期影響を検討する予定である。
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[Journal Article] Clinicopathological significance of combined analysis of cytokeratin19 expression and preoperative serum CYFRA21-1 levels in human lung squamous cell carcinoma.2013
Author(s)
Hanada S, Nishiyama N, Mizuguchi S, Yamano S, Kakehashi A, Wei M, Inoue H, Komatsu H, Chung K, Suehiro S, Wanibuchi H.
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Journal Title
Osaka City Med J
Volume: 59
Pages: 35-44
Peer Reviewed
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[Journal Article] Complexin-2 (CPLX2) as a potential prognostic biomarker in human lung high grade neuroendocrine tumors.2013
Author(s)
Komatsu H, Kakehashi A, Nishiyama N, Izumi N, Mizuguchi S, Yamano S, Inoue H, Hanada S, Chung K, Wei M, Suehiro S, Wanibuchi H.
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Journal Title
Cancer Biomark
Volume: 13
Pages: 171-180
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Diphenylarsinic acid, a chemical warfare-related neurotoxicant, promotes liver carcinogenesis via activation of aryl hydrocarbon receptor signaling and consequent induction of oxidative DNA damage in rats.2013
Author(s)
Wei M, Yamada T, Yamano S, Kato M, Kakehashi A, Fujioka M, Tago Y, Kitano M, Wanibuchi H.
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Journal Title
Toxicol Appl Pharmacol
Volume: 253
Pages: 1-9
DOI
Peer Reviewed
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