筋委縮性側索硬化症[ALS]におけるCD44と病態進行の関連

2013 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25861308
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 松本 智宏 名古屋大学, 医学部附属病院, 医員 (40635570)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2014-03-31
• Keywords: 神経変性疾患 / 細胞膜表面タンパク

Research Abstract

生後6週・12週・18週(発症時)・24週（end stage）のALSモデルマウス（SOD1）と野生型マウス（WT）脊髄からタンパク抽出液を作製し，CD44の発現をWestern blottingで比較した。WTは，ごく少量のCD44発現があるのみで，週齢ごとに変化はなく一定であったが，SOD1では，発症前の時点からWTと比べ CD44の増加を認め，その差は病期が進むほど顕著であった。さらに24週動物の脊髄からmRNAを抽出し，real-time PCRによりmRNAレベルでもCD44を比較したところ，SOD1で有意にCD44が増加していた。
続いて生体内においてCD44を発現する細胞を特定するために，生後24週マウス脊髄切片を免疫組織染色。CD44発現はWTでは ほとんど認められなかったが，SOD1では顕著に増加していた。グリア系細胞マーカーとの二重染色結果から，CD44を発現している細胞は一部がmicroglia，大部分がastrocyteであると考えられた。
生後1日目のWTの脳より混合グリア培養系を樹立。培養開始から3週間後に，microgliaおよびastrocyteを単離した。microgliaはLPS + IFN-γで72時間刺激することで活性化をおこない，astrocyteはIFN-γ+ TNF-α，bFGFを用いて72時間刺激し活性化をおこなった。刺激によるCD44の発現量を調べるため，いずれも細胞と培養上清を個別に回収し，CD44の発現量をWestern blottingで比較したところ，細胞については，controlではCD44の発現はほとんどなかったが，活性化によりCD44の顕著な増加がみられた。上清についてはcontrolも刺激群もshedding型CD44発現は見られなかったことから，発現上昇したCD44は膜貫通型であると考えられた。