2015 Fiscal Year Annual Research Report
精巣内体細胞におけるDAX1の機能解析とアデノウィルスベクターを用いた臨床応用
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25861439
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
黒川 覚史 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (50468253)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | DAX1 / アデノウイルスベクター / 造精機能障害 / セルトリ細胞 / ライディッヒ細胞 / 精巣内体細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
私たちは、これまでに特発性造精機能障害患者の精巣内では転写因子DAX1の発現が低下していることを明らかにした。本研究では、精巣内体細胞における転写因子DAX1の機能解析とアデノウイルスベクターを用いた精巣内遺伝子治療への臨床応用を目指し以下の2つを行った。
１．DAX1発現アデノウイルスベクターの精製と培養細胞への投与
コンストラクトを作製したアデノウイルスベクターをHEK293細胞内で増殖させ、Adeno-X Maxi Purification kit (Clonetech社) のカラムクロマトグラフィーで精製した。さらに、Adeno-X Rapid Titer kitを用いてタイター測定しウイルス溶液を調整した。セルトリ細胞として幼仔期由来のTM4細胞、ライディッヒ細胞として幼仔期由来のTM3細胞を用いた。アデノウイルスベクターによりDAX1の発現を亢進した際の遺伝子変化を定量RT-PCRで解析した。
２．ラット精巣に対するアデノウイルスベクターの投与
ラット精巣に様々なタイターのウイルス溶液を投与し、投与後1、4、7、14日目に精巣を採取した。精巣内投与法に関しては2種類の方法を用いた。精巣間質注入法ではライディッヒ細胞に特異的に遺伝子導入が可能であり、精細管内注入法ではセルトリ細胞に特異的に遺伝子導入が可能である。組織学的な変化(Johnsen scoreや精細管あたりの精原細胞数)とアポトーシスの有無を解析した。
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Research Products
(10 results)
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[Presentation] The space environment induces the enhancement of caveolin expression and leads to germ cell apoptosis2015
Author(s)
Kamisawa Hideyuki, Mizuno Kentaro, Kurokawa Satoshi, Moritoki Yoshinobu, Noshio Hidenori, Nakane Akihiro, Maruyama Tetsuji, Fujita Keiji, Sasaki Shoichi, Hayashi Yutaro, Kojima Yoshiyuki, Kohri Kenjiro
Organizer
American Urological Association Annual Meeting 2015
Place of Presentation
New Orleans（USA）
Year and Date
2015-05-15 – 2015-05-19
Int'l Joint Research
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