2013 Fiscal Year Research-status Report
絨毛外トロフォブラストにおけるLCN2の発現と意義の検討
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25861483
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Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
小原 久典 信州大学, 医学部, 助教 (30598818)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | lipocalin2 / 絨毛外トロフォブラスト / MMP-9活性 / 妊娠初期 / 浸潤能 / 酸素濃度 |
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| Research Abstract |
我々はこれまでに免疫染色によって、lipocalin2 (LCN2) が妊娠初期絨毛の絨毛外トロフォブラスト（以下EVT）で高発現していることを見いだした。そこで妊娠初期絨毛から分離培養した絨毛外トロフォブラスト（以下EVT）とEVTのモデルである絨毛癌細胞株JAR細胞を用いてLCN2の機能解析を行った。まず培養液に組み替えLCN2 （rLCN2）を添加し、24時間後の増殖能をWST-1アッセイで検討したが、両細胞とも無添加と差を認めなかった。一方、浸潤能（マトリゲル浸潤アッセイ）とMMP-9活性（ゼラチンザイモグラフィー）は共に用量依存的に増加し、500ng/mlのLCN2添加で浸潤能はEVTで325％（P<0.01）、JAR細胞で215％（P<0.01）に増加し、MMP-9活性はEVTで169％、JAR細胞で147％に増加した。また、LCN2発現抑制により、JAR細胞の浸潤能は26%まで、MMP-9活性は51％まで低下したが、500ng/mlのrLCN2添加により浸潤能は61％まで回復した。酸素濃度の影響では、両細胞とも低酸素ほどLCN2 mRNA発現、MMP-9活性は増加し、浸潤能も亢進した。特にJAR細胞の浸潤能は、20％酸素下に比較して、2％酸素下で211％（P<0.01）に増加したが、LCN2発現抑制により逆に12％まで著明に抑制された。さらに、この2％酸素下のLCN2発現抑制JAR細胞に500ng/mlのrLCN2添加を行うと、浸潤能は79％まで回復した。
以上より、LCN2は妊娠初期の特に酸素濃度によるEVTの浸潤能調節に重要な役割を果たしていると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初、計画していた通り、培養細胞（EVT、JAR）を用い、LCN2の機能解析、および酸素環境の影響を検討できている。
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| Strategy for Future Research Activity |
基本的には当初の計画通りに進める。LCN2発現による浸潤能・遊走能亢進に関して、MMP-9以外の因子の関与についても検討していく。特に上皮間葉転換に関わる因子についてRT-PCRやwestern blotting、免疫染色で検討していく。また、絨毛外トロフォブラスト分離培養細胞、JAR細胞でのLCN2発現制御についてルシフェラーゼアッセイ、メチル化特異的PCR法等を用いて、検討する。さらに、妊娠初期マウス子宮でのLCN2相同遺伝子24p3の発現および局在を、免疫染色もしくは蛍光免疫染色で検討する。LCN2発現制御機構等の研究を行う。また妊娠マウスにおける発現検討等を進める。
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Research Products
(4 results)
