子宮頸癌の悪性形質と関連するmicroRNAの同定と新規治療にむけた機能解析

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25861506
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 平尾 薫丸 慶應義塾大学, 医学部, 共同研究員 (80327593)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 子宮頸癌 / miRNA

Research Abstract

初年度である平成25年度は、子宮頸癌で高発現するmiRNAを同定するため、準備実験として行っていた3D gene（東レ）の解析を続行した。
HPV16型陽性かつ扁平上皮癌の子宮頸癌患者の担癌状態での血清と、無病再発３年以上の治療後血清からmiRNAを生成し、3D geneによって網羅的に、治療前後での変動を調べた。3D geneの結果のなかで、治療後に減少したmiRNAのうち減少率が高かったもの15種の中から、文献考察を交えて12個の候補miRNAを選択した。これらの候補miRNAについて、患者5名で治療前後の血清中miRNA量を定量的PCR法で測定し、5人中3人以上で1/2以下に減少しているmiRNAとして、３つの候補miRNAを同定した。この3つのmiRNAについて、活性増幅実験と活性抑制実験を行うため、それぞれの試薬を購入した。また、実験を実施する上で、適切な細胞株を検討するため、8種の子宮頸癌細胞株での3つの候補miRNAの発現を検討し、さらに運動能・浸潤能の高い細胞株としてSKG-IおよびSKG-IIIbを選択した。これらの細胞株を用いて、まず活性抑制Inhibitorを導入し、細胞増殖・浸潤・転移に与える影響を現在検討している。
今後は、まずInhibitor実験で、細胞の悪性形質が抑制されたmiRNAを選択し、さらに活性増幅実験で悪性形質が誘導されるかを検討し、候補miRNAをさらに1－2個に絞り、そのターゲットとなる遺伝子の同定を行う。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

予定通り、子宮頸癌で高発現するmiRNAを選択でき、その後の活性増幅実験および抑制実験も順調に進捗している。

Strategy for Future Research Activity

SKG-1細胞株およびSKG-IIIa細胞株を用いて、Inhibitor実験で、細胞の悪性形質が抑制されたmiRNAを選択し、さらに活性増幅実験で悪性形質が誘導されるかを検討して候補miRNAをさらに1－2個に絞る。データベースを用いて、ターゲット遺伝子を選択し、実際にその経路でmiRNAが子宮頸癌の悪性形質と関連するかを検討していく。