Effect of the wound healing by the bFGF/ heparin combination

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25861685
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 金澤 成行 大阪大学, 医学系研究科, 招へい教員 (50506243)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: bFGF / ヘパリン / 創傷治癒

Outline of Annual Research Achievements

FGFはヘパリンと結合し複合体を作ることでFGFレセプターを活性化することが、知られている。bFGFとヘパリンの併用による創傷治癒促進効果を明らかにすることが本研究の目的である。これまでの結果でbFGF単独群と比較して、bFGF・ヘパリン併用群は有意な細胞数の増加、遊走速度の増大を認めた。そして、細胞増殖や生存に関与するタンパクであるERKやAktが、bFGF投与無し群に比べて、bFGF単独投与群（bFGF10ng/ml）では、それぞれのタンパクでリン酸化（活性化）が確認できた。さらに、bFGF/ヘパリン併用群（bFGF10ng/ml・ヘパリン10μg/ml）ではそのリン酸化までの時間の短縮を認めた。bFGF刺激による線維芽細胞増殖におけるシグナルにERK、Aktの関与が示唆された。
また、細胞遊走に関与するタンパクであるJNKの活性化の変化であるが、bFGF単独投与群（bFGF10ng/ml）と比較して、bFGF/ヘパリン併用群（bFGF10ng/ml・ヘパリン10μg/ml）ではそのリン酸化までの時間の短縮を認めた。bFGF刺激による線維芽細胞遊走におけるシグナルにJNKの関与が示唆される結果であった。
さらには、11週齢の糖尿病モデルマウスを用いて、両側背部に1個ずつ直径１cm大の皮膚欠損を作成した。これに対してbFGF投与無し群、bFGF単独群（bFGF10μg/ml）、bFGF/ヘパリン併用群（bFGF10μg/ml・ヘパリン10mg/ml）の3群に分けて、0.5ml皮膚欠損部に添加した。結果であるが、bFGF/ヘパリン併用群（bFGF10μg/ml・ヘパリン10mg/ml）、bFGF単独群（bFGF10μg/ml）、bFGF投与無し群の順に創傷治癒面積の縮小を認めた。
これらの組織を回収し、H.E.染色および、線維芽細胞のマーカーである抗vimentin抗体を用いて免疫組織染色を行った。bFGF単独投与群と比較すると、ヘパリン併用群では線維芽細胞の増殖や遊走の促進が認められた。また、H.E.染色では上皮細胞の遊走が促進していることがわかった。