TGF-beta/Smadシグナルを標的とした口腔扁平上皮癌転移メカニズムの解析

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25861934
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 米川 敦子 大阪大学, 歯学部附属病院, 医員 (70600914)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 口腔扁平上皮癌 / リンパ節転移 / TGF-beta / 運動能 / EMT

Outline of Annual Research Achievements

口腔扁平上皮癌頸部リンパ節転移のメカニズムの解明を目的に, 口腔扁平上皮癌頸部リンパ節高転移株であるSAS-LM8を使用して実験を行った. EMTを強力に誘導するTGF-betaは発癌初期では強力な細胞増殖抑制作用によって癌抑制的に働くが, 癌の進展とともに後期では癌促進的に働き, 癌の浸潤・転移に関与することが知られている. SAS-LM8とその親株SAS-GFPに対するTGF-betaの影響を検討するため, SAS-LM8とSAS-GFPにTGF-beta刺激を行い, 両細胞の細胞形態, 増殖能, 遊走能の変化について分析した. TGF-beta刺激により, SAS-LM8とSAS-GFPの細胞形態に変化は認めず, 細胞間の接着も密のままであった. 細胞増殖能については, MTT assayで検討した. TGF-beta刺激を行っても,SAS-LM8, SAS-GFPともに細胞増殖能に変化を認めなかった. 遊走能は, migration assayとwound healing assayで検討した. TGF-beta刺激によりSAS-LM8, SAS-GFPともに細胞遊走能の亢進が認められた.

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

産休および育休のため, H26年6月30日からH27年3月31日まで実験を中断したため.

Strategy for Future Research Activity

TGF-beta刺激により, SAS-LM8, SAS-GFPともに遊走能の亢進が認められた. さらに浸潤能の変化についても検討を行う. TGF-beta刺激によるEMT関連遺伝子の発現の変化をRT-PCRやimmunoblottingで解析する. このTGF-beta刺激によるSAS-LM8とSAS-GFPの変化がSmad経路を介するのか, non-Smad経路を介するのかを検討するために, Smadのリン酸化をimmunoblottingで確認するほか, リン酸化Smad2/3やSmad4が核に局在するかを蛍光免疫染色で観察する. Smadのリン酸化が認められない場合は, non-Smad経路を介してのシグナル伝達が予想されるので, MAPK, PI3K/Akt, small GTPaseの活性を確認する.

Causes of Carryover

H26年6月30日からH27年3月31日まで産休および育休のため, 実験及び研究発表を行えなかったため.

Expenditure Plan for Carryover Budget

H26年度に予定していた実験計画を継続し, 必要な物品の購入, 情報収集および学会発表のための旅費, 論文発表のための出版費などに使用を計画している.