2015 Fiscal Year Research-status Report
TGF-beta/Smadシグナルを標的とした口腔扁平上皮癌転移メカニズムの解析
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25861934
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
米川 敦子 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 招聘教員 (70600914)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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Keywords | 口腔扁平上皮癌 / リンパ節転移 / TGF-beta / 運動能 / EMT |
Outline of Annual Research Achievements |
TGF-beta/ Smadシグナルが口腔扁平上皮癌頸部リンパ節転移に及ぼす影響について解明するために口腔扁平上皮癌頸部リンパ節高転移株であるSAS-LM8とその親株SAS-GFPを使用して実験を行った.EMTを強力に誘導するTGF-betaは発癌初期では強力な細胞増殖抑制作用によって癌抑制的に働くが, 癌の進展とともに後期では癌促進的に働き, 癌の浸潤・転移に関与することが知られている. これまでにSAS-LM8とSAS-GFPにTGF-beta刺激を行うと, 両細胞の細胞形態や細胞間接着, 細胞増殖能に変化は認めなかったが, 両細胞の遊走能が亢進した. さらにEMT関連マーカーのRT-PCRでは両細胞ともにTGF-beta刺激によりSlug, Snail, Twistの発現に大きな変化はなく, E-cadherinの発現にも大きな変化は認めなかった. N-cadherin, Vimentinの発現はTGF-beta刺激により両細胞ともに増強傾向を示し, 間葉移行の傾向を認めた. また両細胞ともにTGF-beta刺激よってbeta-cateninの局在は変化しなかった. TGF-beta刺激によって, 両細胞ともにWnt5aの発現に変化はなかったが, Wnt5bの発現の亢進が認められた. アクチン細胞骨格の観察では両細胞ともにTGF-beta刺激によって細胞周囲に仮足様突起の伸展が認められた.
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
H26年6月30日からH27年3月31日まで産休及び育休のために実験を中断し, H27年4月1日より実験を再開したが, 育児のために当初の計画通りに実験が遂行できなかったため.
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Strategy for Future Research Activity |
TGF-beta刺激によるSAS-LM8とSAS-GFPの変化がSmad経路を介するのか, non-Smad経路を介するのかを検討するために, Smadのリン酸化をimmunoblottingで確認するほか, リン酸化Smad2/3やSmad4が核に局在するかを蛍光免疫染色で観察する. Smadのリン酸化が認められない場合は, non-Smad経路を介してのシグナル伝達が予想されるので, MAPK, PI3K/Akt, small GTPaseの活性を確認する. またTGF-beta刺激による両細胞の細胞運動能の亢進がどの遺伝子を介するのかを解析するために細胞運動能に関連する遺伝子のreal time PCR arrayを行う.
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Causes of Carryover |
育児のために, 当初の計画の通りに実験および研究発表, 論文発表が行えなかったため.
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
H27年度に予定していた実験計画を継続し, 必要な物品の購入, 情報収集および学会発表のための旅費, 論文発表のための出版費などに使用を計画している.
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