2015 Fiscal Year Annual Research Report
羊膜上培養歯根膜由来細胞シートを用いた新たな骨再生医療に関する基礎的研究
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25861966
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
雨宮 傑 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90398389)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 移植・再生医療 / 再生医学 / 細胞・組織 / 歯学 / 臨床 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
骨再生能を有した新規培養歯根膜由来細胞シートの開発を最終目標に、羊膜上にて歯根膜由来細胞の骨分化誘導培養を行った。同培養シートは骨芽細胞関連のタンパク発現を認め、新生骨形成能、すなわち歯周組織再生を促進する細胞を有していることを免疫組織化学的に明らかにしてきた。そして、上記にて得られた培養細胞シートのin vivoにおける細胞動態、すなわち実験動物の皮下に移植することによる新生骨形成の可能性についての検討を行った。羊膜は、帝王切開時の胎盤より採取し、洗浄後、羊膜上皮細胞を除去したものを研究に供した。またPDL細胞は、抜去した智歯より歯根膜組織を採取し初代培養後、3から4代継代したものを研究に使用した。継代培養したPDL細胞は、羊膜上に播種し、約4週間、骨分化誘導培地で培養を行った。上記にて得られた培養細胞シートは、羊膜ごとBALB/cヌードマウス背部皮下への移植を行い、8 週後に移植部位を採取した。移植8週後、軟Ｘ線写真にて羊膜上培養PDL細胞シートの移植部に不透過像を認め、H-E染色像で同部位に石灰化様組織を認めた。さらに、アリザリン・レッドS染色で石灰化物形成を、またvon Kossa染色で石灰化用組織を認めた。免疫染色像では、間葉系細胞マーカーであるvimentin、骨芽細胞マーカーであるbone Gla-proteinの発現を認めた。本研究にて骨分化誘導培養を行った培養PDL細胞シートは、羊膜を培養基質として用いたことで、移植操作に耐えうる十分な強度を供えていた。また移植後における免疫染色像にて、間葉系細胞マーカーのvimentin、骨芽細胞マーカーのosteocalcin陽性細胞を認め、生体内の環境下においてもその性質を維持していることが示された。さらにはアリザリン･レッドS陽性、von Kossa陽性の石灰化細胞外基質の形成が認められた。
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Research Products
(3 results)
