2015 Fiscal Year Annual Research Report
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25870530
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
宇野 直輝 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 助教 (60624781)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | MLPA / ライゲーション |
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| Outline of Annual Research Achievements |
MLPA (Multiplex ligation-dependent probe amplification) がハイブリダイゼーション及びライゲーション非依存的に起こることを証明した。さらに、MLPAの特異性がライゲーションに依存しないことを明らかにした。ライゲーション非依存的MLPA経路による核酸増幅をライゲーション非依存的プローブ増幅（ligation-independent probe amplification）と命名し、この方法をキノロン耐性肺炎球菌の検出に応用することに成功した。
ライゲーション非依存的プローブ増幅はハイブリダイゼーションとライゲーションを必要としないPCR単独の反応であるため、MLPAよりも迅速かつ簡単である。さらに、MLPAに必要とされる長鎖プローブを必要としないため、市販の合成オリゴヌクレオチドが利用できる汎用性がある。肺炎球菌のキノロン耐性決定領域の一塩基変異を区別することに成功したことから、ライゲーション非依存的プローブ増幅が一塩基を区別する特異性を有することを実証した。しかしながら、反応自体は複雑であるため、マルチプレックス化が困難であり、マルチプレックス反応を大きな特徴とするMLPAの代替方法とはならない。目的に掲げた等温増幅反応は、PCRの代わりにヘリケース依存的増幅法を用いることで、合成ヌクレオチドを鋳型とした等温増幅は成功したが、ゲノムDNAに対しては成功しなかった。
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