2015 Fiscal Year Annual Research Report
1回膜貫通型糖蛋白質GPNMBの小胞体および酸化ストレス応答機能の解明
| Project/Area Number |
25870605
|
|---|
| Research Institution | Gifu Pharmaceutical University |
|---|
Principal Investigator |
鶴間 一寛 岐阜薬科大学, 薬学部, 講師 (50524980)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | GPNMB / 小胞体ストレス / GRP78 / スプライシング |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
これまでに、GPNMBが小胞体ストレス存在下でシャペロン分子であるGRP78の発現を増加させることを明らかにした。GPNMBは細胞外に放出されるN末端側と細胞内に留まるC末端側に酵素によって切断される。そこで、GPR78の発現誘導にGPNMBのどの部位が必要であるか検討したところ、完全長のGPNMBが重要であることを明らかにした。
本年度は、GRP78に対するGPNMBのスプライシング促進機構について詳細に検討するため、in vitroスプライシングアッセイを試みた。GRP78の未成熟なmRNA配列をPCR法にて単離してcDNAを作製後、逆転写により未成熟なGRP78 mRNAを得た。電気泳動により目的のmRNAが合成されていることを確認して、放射性同位体（RI)で標識された33P-UTPを用いて同様に未成熟なGRP78 mRNAを合成、精製した。マウス運動ニューロン様細胞株であるNSC34細胞にGPNMBを過剰発現させ、核抽出物を得た。この核抽出物とRI標識されたGRP78 mRNAをチューブ内で反応させ、その後電気泳動を行いスプライシング反応によるGRP78 mRNAの泳動の変化を観察した。現在、反応の至適条件等の実験を行っており、データ取得後に本試験を行い解析する予定である。
|
-
[Presentation] 未定2016
Author(s)
野田泰裕、鶴間一寛、嶋澤雅光、原英彰
Organizer
第11回小胞体ストレス研究会
Place of Presentation
岐阜大学サテライトキャンパス
Year and Date
2016-10-10 – 2016-10-11
-
