2013 Fiscal Year Research-status Report
新規アンジオテンシン受容体ワクチンの開発とその応用性の検討
Project/Area Number |
25870715
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Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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Research Institution | Keio University |
Principal Investigator |
畔上 達彦 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (60573376)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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Keywords | 高血圧 / ワクチン |
Research Abstract |
本研究はアンジオテンシンII 1型受容体(AT1)に対する経口・経鼻ワクチンの作成を目的とし、平成25年度においては、遺伝子組換えイネ(MucoRice)を用いた経口型AT1ワクチン,cCHPナノゲルを用いた経鼻型AT1ワクチンの作成を予定していた。 経口型AT1ワクチンに関しては、当初の予定通り、ラットAT1の第2細胞外ループ配列(166-192 a.a)とコレラ毒素Bサブユニットのキメラ蛋白を発現させるための遺伝子を合成し、この合成遺伝子をコメの蛋白貯蔵器官であるProtein Body特異的プロモーターを有するベクターに挿入した。得られたベクターをアグロバクテリウムに形質転換したのち、アグロバクテリウムを多分化能を有するコメのカルスに感染させ、イネに遺伝子導入を試みた。発育したイネより得られたコメ種子の一部を、SDS-PAGE・ウエスタンブロットにかけ、AT1-CTBキメラ蛋白の発現を確認した。今後は、蛋白の発現が確認できたイネを交配させ、遺伝的にhomogeneousとなるように継代を進めていく。 経鼻型AT1ワクチンに関しては、AT1の繰り返しペプチドのみでは抗原性が確保できなかったため、B型肝炎ウイルス表面抗原(HBs)とキメラ蛋白形成するように、大腸菌を用いて蛋白合成を試みた。しかし、発現量は微量であり、発現システムを大腸菌から昆虫細胞に切り替えたものの、依然として発現量は微量であったため、現在は、HBs以外の蛋白とキメラ蛋白を合成する予定である。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成25年度の計画では、目的とするワクチンの作成が主体であり、「研究実績の概要」に記載したように、経口ワクチンは予定通りに進んでいる。一方、経鼻ワクチンに関しては、当初の計画通りにワクチンの抗原蛋白の作成を試みたものの、抗原性が得られず、さらに追加で新規の抗原蛋白(HBsとのキメラ蛋白)の合成を試みたが、発現量がわずかであり、ワクチンとして精製するには十分量が得られなかった。
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Strategy for Future Research Activity |
経口AT1ワクチンに関しては、homogeneousとなるように継代を進めた上で、得られた抗原蛋白の免疫原性や、実際の降圧効果を確認していく(平成26年度)。 経鼻AT1ワクチンに関しては、新たなキメラ蛋白を大腸菌を用いて作成した上で、経口ワクチンと同様に効果を評価していく(平成26年度)。
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Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
未使用額の発生は、効率的な物品調達を行った結果であり、翌年度の消耗品購入に充てる予定である。 当初予定していた経鼻ワクチン実験において、抗原蛋白の発現量がわずかであり、その後の解析の実施が遅れたため、25年度の研究費に未使用が生じたが、26年度に行う予定の研究計画とあわせて実施する。
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