2013 Fiscal Year Research-status Report
ヒトNK細胞が増殖する新規ヒト化マウスによるin vivo細胞傷害性試験系の開発
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25871075
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Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Research Institution | Central Institute for Experimental Animals |
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Principal Investigator |
片野 いくみ 公益財団法人実験動物中央研究所, その他部局等, 研究員 (90442558)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ヒト化マウス / NK細胞 / ヒト免疫 / hIL-2 / hIL-15 |
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| Research Abstract |
申請者らが開発した、ヒトインターロイキン-2(IL-2)遺伝子を導入したNOG-hIL-2 Tgマウスはヒト造血幹細胞を移植してヒト化すると、ヒト腫瘍細胞を傷害する能力のある機能的なNK細胞が劇的に分化する。
本研究では、ヒト化NOG-hIL-2 Tgマウスを使い、in vivoでヒトNK細胞によって引き起こされる抗体依存性細胞傷害(ADCC)活性を検証することが可能となる細胞傷害試験系の作製を試みる。
平成25年度は、NOG-hIL-2 Tgマウスへ既存のヒト腫瘍細胞株および抗体医薬品を多様に組み合わせて移植・投与することで、in vivoでの細胞傷害試験に最適と考えられる細胞・抗体の組み合わせを決定できた。この細胞・抗体をヒト造血幹細胞を移植してヒト化したNOG-hIL-2 Tgマウスに用いた結果、ヒトNK細胞に起因すると考えられる腫瘍抑制効果（ADCC活性）を確認することができた。
また、機能的NK細胞の分化・成熟に必須と言われているhIL-15遺伝子を導入したNOG-hIL-15 Tgマウスを樹立できた。さらに、NOG-hIL-15 Tgマウスへヒト造血幹細胞を移植しヒト化することで、NOG-hIL-2 Tgマウスと同様にヒトNK細胞が顕著に分化することを確認した。
平成26年度は、引き続きNOG-hIL-2 Tgマウスを用いたin vivo細胞傷害試験系の検証と、NOG-hIL-15 Tgマウスの移植条件の最適化、およびNOG-hIL-2/hIL-15 double Tgマウスの作製を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
1) NOG-hIL-2 Tgマウスに、標的抗原を高発現するヒト腫瘍細胞株を移植した後に抗体医薬品を投与することで、in vivo ADCCの作製に適する組み合わせを選定できた。
2) １）で選定した腫瘍細胞株および医療用抗体をヒト造血幹細胞を移植したNOG-hIL-2 Tgマウスに用いることで、in vivo細胞傷害試験を実施できた。
3) 新規NOG-hIL-15 Tgマウスを樹立した。
4) NOG-hIL-15 Tgマウスにヒト造血幹細胞を移植し、NOG-hIL-2 Tgマウスと同様にヒトNK細胞の分化が亢進することを確認した。
以上の結果から、申請書に記載した計画通り、おおむね順調に進展していると考えられる。また、現在1),2)の結果を含めた論文を作成しており、近日中に投稿する予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
1) NOG-hIL-2 Tgマウスを用いたin vivo細胞傷害試験系：今回樹立したin vivo細胞傷害試験系の追試を行う。今回、ヒトNK細胞単独もしくは抗体単独でも腫瘍の成長が若干遅延する傾向が認められたことから、ヒトNK細胞以外の要因による腫瘍抑制効果についても検討する。
2) NOG-hIL-15 Tgマウスの特性検査：ヒト造血幹細胞の移植実験、およびヒト末梢血由来NK細胞の移植実験を行い、ヒトNK細胞の分化・生着能について検証する。また、ヒト化したNOG-hIL-15 TgマウスからヒトNK細胞を分離し、細胞の性質についても検証する。さらに、ヒト化したNOG-hIL-15 Tgマウスにヒト腫瘍細胞株を移植し、細胞傷害活性を有するか検証する。
3) NOG-hIL-2/hIL-15 double Tgマウスの作製：NOG-hIL-2 TgマウスとNOG-hIL-15 Tgマウスを交配することで、NOG-hIL-2/hIL-15 double Tgマウスの作製を得る。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
申請段階では、国内学会（2か所）の旅費を含めて計画をしていたが、1か所は参加できなくなったことに加え、もう1か所は他の研究費を使用することができたため余剰分ができた。この余剰分を試薬の購入代にしようと検討したが高額な製品であったため、次年度分の経費と併せて購入することにした。
次年度以降の物品費と併せて、高額試薬の購入に充てる。
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[Journal Article] Establishment of a human allergy model using human IL-3/GM-CSF-transgenic NOG mice.2013
Author(s)
Ito R, Takahashi T, Katano I, Kawai K, Kamisako T, Ogura T, Ida-Tanaka M, Suemizu H, Nunomura S, Ra C, Mori A, Aiso S, Ito M.
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Journal Title
J Immunol.
Volume: 191
Pages: 2890-2899
DOI
Peer Reviewed
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