2013 Fiscal Year Annual Research Report

糖尿病で生じる高グルコース・高インスリン状態がアミロイドβ産生に及ぼす影響

Research Project

Project/Area Number	25893077
Research Category	Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
Research Institution	Niigata University
Principal Investigator	徳武孝允新潟大学, 医歯学総合病院, 医員 (00707838)
Project Period (FY)	2013-08-30 – 2015-03-31
Keywords	アルツハイマー病 / グルコース / インスリン / アミロイドβ
Research Abstract	脳内のアミロイドβ（Aβ）沈着は，アルツハイマー病の病態機序の初期イベントとして認識されており，Aβ蓄積からリン酸化タウ蓄積，神経細胞死にいたる「アミロイドカスケード」仮説を中心に，アルツハイマー病の治療方法の開発が進められている．また糖尿病やインスリン抵抗性がアルツハイマー病発症の後天的リスク因子となることが国内外の疫学調査から明らかにされている．本研究課題では，糖尿病に伴い生じる高グルコース・インスリン状態およびインスリン抵抗性がアルツハイマー病発症にかかわる機序について検討するため，高グルコース状態，高インスリン状態を神経系培養細胞で再現するアッセイ系を構築し，その条件下における神経系培養細胞のAβ蓄積産生，糖利用などについて解析を行う．本年度は，高グルコース状態におけるAβ産生量について検討を行った．スウェーデン型APP変異安定発現細胞（N2a swe）を高グルコース状態で培養を行い，培養液中に存在するAβについてウエスタンブロットおよびELISAによる検討を行った．ELISAを用いた検討では，Aβ42/40の変化を認めなかったが，N2a swe培養液中総Aβは，200mg/dL以上の高グルコース状態で増加を認めた．より生理的なAβ分泌に及ぼす影響を検討するため，野生型N2a細胞においても同様の検討を行い，培養液中に分泌される内在性Aβを高感度ELISAにより検討した． N2a sweでの実験結果と同様に，Aβ42/40の変化は認めなかったが、高グルコース状態では総Aβ量が増加した．
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 研究計画に記載した予定にほぼ沿った形で研究が進行しているため
Strategy for Future Research Activity	平成25年度に検証した高グルコース，高インスリンがAβ産生に及ぼす効果を，生理的な条件で検証するために，初代神経培養細胞が産生する内在性Aβにおいて検証を進める．初代神経培養細胞における内在性Aβ量はウエスタンブロットによる検出感度に達しないために，高感度Aβ特異的ELISA アッセイを用いる．また，高グルコース，高インスリン状態が神経細胞の糖利用に影響を与えるかについて，特にインスリン依存性/非依存性glucose transporterに着目して検討を行う．