2013 Fiscal Year Annual Research Report
マダニ由来培養細胞株の樹立ならびにマダニ類が保有するウイルスの網羅的探索
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25893151
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Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
鍬田 龍星 山口大学, 理工学研究科, 学術研究員 (00711219)
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| Project Period (FY) |
2013-08-30 – 2015-03-31
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| Keywords | 衛生害虫 |
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| Research Abstract |
本研究では、本邦マダニ由来の細胞株樹立の試みと、マダニ由来細胞株を用いた、本邦マダニ類が保有するウイルスの網羅的探索を行う。
本研究課題において、初年度はマダニ組織片を用いた初代培養の作出を中心に行った。初代培養に用いたマダニ種は、野外捕集タカサゴキララマダニ、フタトゲチマダニ、キチマダニを主とし、組織片にはマダニ卵または成マダニ諸器官（唾液腺、中腸、筋繊維等）を用いた。マダニ卵または成マダニ諸器官の表面殺菌には、塩化ベンザルコニウム液、70%エタノール、ポビドンヨード液を用い、各組織片へのダメージが少なく且つ充分な殺菌効果が得られる条件を検討した。組織片の初代培養のための基礎培地として、マダニ培養細胞に実績のあるL-15培地の他、蚊培養細胞に実績のあるVP-12培地、MM培地を用いた。また、培養液の添加物として、ウシ胎児血清、トリプトースフォスフェイトブロスの各々または混合物を様々な濃度（10～15%）で試みた。培養容器には、ガラスシャーレ、ポリスチレン製シャーレ、リジンコートシャーレ、コラーゲンコートシャーレを用い、組織片はすべて30℃インキュベーター内（暗条件）に静置した。
ウイルスの網羅的探索に関しては、初年度は本邦マダニの捕集と保存に努めた。国内数地点においてマダニの捕集を行い、実験室に持ち帰り種を同定後、ウイルス分離用乳剤のため凍結保存した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
各条件下でマダニ由来組織片の培養区を設けた結果、いくつかの区において、雑菌の増殖が見られないマダニ生細胞の維持が可能となり、充分な成果が得られた。しかし、これらはまだ著しい細胞増殖までには至っていない。そこで本年度はこれら生細胞の維持・継代を続けるとともに、他にマダニ培養細胞で実績のある培養液も新たに用いて、引き続きマダニ由来組織切片の作成を実施する。
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| Strategy for Future Research Activity |
最終年度は引き続きマダニ由来細胞株の樹立を目指すとともに、野外捕集マダニからのウイルス分離を実施する。野外捕集マダニを種または発育ステージに基づいてプール分けを行い、ウイルス分離用乳剤を調整する。乳剤を接種する培養細胞は、現段階でマダニ由来の細胞株が安定しないことから、当面は哺乳動物由来の培養細胞を用いる。なお、現在得られているマダニの生細胞片については、ウイルスを接種し、各ウイルスに対する感受性（感染性、増殖性）を調査する予定である。
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Research Products
(14 results)
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[Journal Article] Surveillance of Japanese encephalitis virus infection in mosquitoes in Vietnam from 2006 to 2008.2013
Author(s)
Kuwata R, Nga PT, Yen NT, Hoshino K, Isawa H, Higa Y, Hoang NV, Trang BM, Loan do P, Phong TV, Sasaki T, Tsuda Y, Kobayashi M, Sawabe K, Takagi M.
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Journal Title
Am J Trop Med Hyg.
Volume: 88(4)
Pages: 681-688
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Characterization of Dak Nong virus, an insect nidovirus isolated from Culex mosquitoes in Vietnam.2013
Author(s)
Kuwata R, Satho T, Isawa H, Yen NT, Phong TV, Nga PT, Kurashige T, Hiramatsu Y, Fukumitsu Y, Hoshino K, Sasaki T, Kobayashi M, Mizutani T, Sawabe K.
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Journal Title
Arch Virol
Volume: 158(11)
Pages: 2273-2284
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] ベトナム捕集蚊より分離された新規ニドウイルスの性状解析2013
Author(s)
鍬田龍星、佐藤朝光、伊澤晴彦、Yen, Nguyen Thi、Phong, Tran Vu、Nga, Phan Thi、倉重友和、平松征洋、福光由起、星野啓太、佐々木年則、水谷哲也、前田健、小林睦生、沢辺京子
Organizer
第61回日本ウイルス学会学術集会
Place of Presentation
神戸国際会議場（兵庫県神戸市）
Year and Date
20131110-20131112
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