2013 Fiscal Year Annual Research Report
口腔癌における足場依存性喪失に関わる新規分子の同定および機能解析
| Project/Area Number |
25893154
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
|
| Research Institution | Yamaguchi University |
|---|
Principal Investigator |
竹縄 隆徳 山口大学, 医学部附属病院, 診療助教 (30711270)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-08-30 – 2015-03-31
|
| Keywords | 口腔癌 / 悪性腫瘍 / プロテオーム / タンパク質 / 分子生物学 |
|---|
| Research Abstract |
口腔扁平上皮癌由来細胞株5種(HSC2, HSC3, HSC4, SAS, Ca9-22)、および正常上皮由来細胞株2種(非発癌性の表皮細胞由来細胞株であるHaCaT)、上皮異形成症由来細胞株1種(DOK)を使用した。炎症性マウス線維肉腫腫瘍モデル(QRsPs細胞株)の単一腫瘍細胞由来の性質の異なる2種類のクローン細胞に関する、プロテオーム解析による差次的発現解析の結果、発現に有意差を認めたタンパク質をリストアップした。その候補タンパク質について、細胞の足場依存性喪失に関与する因子を中心にさらに検討を行い、10種類に絞り込みを行った。これらの候補タンパク質について、口腔扁平上皮癌由来細胞株と正常上皮由来細胞株、上皮異形成症由来細胞株におけるmRNAReal-Time PCRを使用して確認した。細胞株からRNAを抽出し、逆転写後、SYBR Green法によるReal-time PCRを施行し、相対的定量法（ΔCT法）を用いて、口腔癌に高発現している遺伝子を同定した。SYBR GREEN法ではPCR効率の低下による定量性の低下が問題となるが、米国IDT社が設計したプライマーを用いて連続希釈テンプレートを用いたPCR効率の検討を行い、結果が100％に近いものを定量に用いた。上記により、さらに細胞の足場依存性喪失に関与する因子の絞り込みを行った。現在、絞り込まれた因子について、タンパク質の発現状況をWestern blottingを用いて発現を確認中である。
今後、絞り込みを行った因子に関して、臨床検体パラフィンブロックを用いた遺伝子発現の検討を、Real-Time PCR 法および免疫組織化学染色法により行い、臨床検体中の候補タンパク質のmRNAおよびタンパク質の発現状況を確認する。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
現在、目標とするタンパク質候補の絞り込みを行っている途中である。In vitroの実験系におけるRNAレベルおよびタンパク質レベルの発現解析により候補因子は絞り込まれたが、平成25年度行う予定であった、臨床検体における検討がまだ行われていない。
|
| Strategy for Future Research Activity |
速やかに臨床検体における発現解析を行うことで、候補因子の絞り込みを完了させる。その後、平成26年度の研究課題である、候補因子に対するsiRNAを用いた検討を行い、目標である口腔癌における細胞の足場依存性喪失に関与する因子を同定し、報告する。
|
