2014 Fiscal Year Annual Research Report
フォワードジェネティクスで同定した新規睡眠制御遺伝子による睡眠覚醒制御機構の解明
| Project/Area Number |
26220207
|
|---|
| Research Institution | University of Tsukuba |
|---|
Principal Investigator |
柳沢 正史 筑波大学, 国際統合睡眠医科学研究機構, 教授 (20202369)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上田 壮志 筑波大学, 国際統合睡眠医科学研究機構, 助教 (00599821)
高橋 智 筑波大学, 医学医療系, 教授 (50271896)
船戸 弘正 筑波大学, 国際統合睡眠医科学研究機構, 教授(WPI-IIIS) (90363118)
LIU Qinghua 筑波大学, 国際統合睡眠医科学研究機構, 教授 (90723792)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-05-30 – 2019-03-31
|
| Keywords | 睡眠覚醒 / フォワード・ジェネティックス / 遺伝子改変マウス / 神経科学 / 睡眠障害 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題は、我々がフォワード・ジェネティックスの手法を用いて樹立した睡眠異常マウス家系であるSleepy変異マウスおよびDreamless変異マウスに着目して、睡眠覚醒制御機構、特に睡眠量を規定する神経機構や、レム睡眠制御の神経回路を明らかにすることである。
Sleepy変異マウスは顕著な覚醒時間の短縮を示す。Sleepy遺伝子変異による覚醒時間短縮の責任神経回路を同定するために、Cre-loxPシステムを利用して特定の神経細胞集団でSleepy遺伝子変異を惹起できるような遺伝子改変マウスを作成した。このSleepy遺伝子改変マウスは筑波大学内での繁殖を進めている。Sleepy蛋白が細胞内蛋白質であることから、Sleepy蛋白の細胞内シグナル伝達や遺伝子発現における役割を明らかにするため、Sleepy蛋白上の異なるエピトープに対する抗体を作成した。これらの抗体は、Sleepy蛋白を過剰発現させた細胞だけではなく、マウス脳でもSleepy蛋白を特異性良く検出した。
Dreamless変異マウスはレム睡眠の顕著な減少を示す。同定したDreamless遺伝子変異のレム睡眠減少への因果性を証明するため、CRISPR法を用いてDreamless遺伝子に点突然変異を導入したマウスを作成した。F0世代マウスにおいて、Dreamless遺伝子に点突然変異が正しく導入されていることを確認することができた。Cas9遺伝子の挿入は2％程度のマウスに認められた。F0世代マウスは数が少ない上にキメラ動物であるため睡眠覚醒行動検討に適さない。Off-target変異が無いことが確認でき、Cas9遺伝子挿入の無いF0世代マウスを交配させてF1世代を作成している。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成26年度の主な研究計画内容は、遺伝子改変マウスの作製、繁殖、交配である。いずれも計画通りに進展している。
|
| Strategy for Future Research Activity |
順調に進展しているため、今後も研究計画に則り研究全体を進展させていく。
|
Research Products
(31 results)
-
-
-
-
-
-
[Journal Article] Potential role of orexin and sleep modulation in the pathogenesis of Alzheimer's disease.2014
Author(s)
Roh JH, Jiang H, Finn MB, Stewart FR, Mahan TE, Cirrito JR, Heda A, Snider BJ, Li M, Yanagisawa M, de Lecea L, Holtzman DM
-
Journal Title
Journal of Experimental Medicine
Volume: 211
Pages: 2487-2496
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Knockout of endothelial cell-derived endothelin-1 attenuates skin fibrosis but accelerates cutaneous wound healing2014
Author(s)
Makino K, Jinnin M, Aoi J, Kajihara I, Makino T, Fukushima S, Sakai K, Nakayama K, Emoto N, Yanagisawa M, Ihn H.
-
Journal Title
PLoS One
Volume: 9
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
-
[Journal Article] Essential role of sympathetic endothelin A receptors for adverse cardiac remodeling2014
Author(s)
Lehmann LH, Rostosky JS, Buss SJ, Kreusser MM, Krebs J, Mier W, Enseleit F, Spiger K, Hardt SE, Wieland T, Haass M, Lüscher TF, Schneider MD, Parlato R, Gröne HJ, Haberkorn U, Yanagisawa M, Katus HA, Backs J
-
Journal Title
Proc Natl Acad Sci U S A
Volume: 111
Pages: 13499-13504
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] MafB promotes atherosclerosis by inhibiting foam-cell apoptosis.2014
Author(s)
Hamada M, Nakamura M, Tran MT, Moriguchi T, Hong C, Ohsumi T, Dinh TT, Kusakabe M, Hattori M, Katsumata T, Arai S, Nakashima K, Kudo T, Kuroda E, Wu CH, Kao PH, Sakai M, Shimano H, Miyazaki T, Tontonoz P, Takahashi S
-
Journal Title
Nature Comminications
Volume: 5
Pages: 3147
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
[Presentation] Identification of a single nucleotide substitution specific to the Sleepy mutant mouse pedigree by linkage analysis and whole exome sequencing2014
Author(s)
Hiromasa Funato, Chika Miyoshi, Makito Sato, Aya Ikkyu, Noriko Hotta, Miyo Kakizaki, Satomi Kanno, Kanako Harano, Fuyuki Asano, Tomoyuki Fujiyama, Tomohiro Suzuki, Shigeraru Wakana, Masashi Yanagisawa
Organizer
Neuroscience 2014
Place of Presentation
Washington DC, USA
Year and Date
2014-11-17 – 2014-11-17
-
-
-
[Presentation] 睡眠・覚醒の謎に挑む2014
Author(s)
柳沢正史
Organizer
読売テクノ・フォーラム
Place of Presentation
日本プレスセンター（東京都千代田区）
Year and Date
2014-09-19 – 2014-09-19
Invited
-
-
-
-
-
-
-
-
-
[Presentation] 睡眠・覚醒の謎に挑む2014
Author(s)
柳沢正史
Organizer
内分泌代謝学サマーセミナー
Place of Presentation
河口湖富士レークホテル（山梨県南都留郡）
Year and Date
2014-07-11 – 2014-07-11
Invited
-
-
