2014 Fiscal Year Annual Research Report
Rif1タンパク質による複製、組換え、修復，転写などの包括的制御機構の解明
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26251004
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science |
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Principal Investigator |
正井 久雄 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学分野, 副所長 (40229349)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 染色体 / 核 / DNA複製 / 組換え / 修復 / 転写 / Rif1タンパク質 / DNA結合 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
動物細胞発現系を用いて、Rif1全長 あるいはRif1のC端・N端由来のポリペプチドを発現し、可溶化画分に回収できることを確認した。また、さらにaffinity カラムを用いて精製した。
これらのタンパク質を電子顕微鏡で観察した。まだ不純物が多いので、厳密な結果は得られなかったが、巨大な複合体が観察された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
大腸菌での精製が困難であったRif1タンパク質を動物細胞で発現し可溶性画分に回収し、精製することができた。G4DNA結合に必要なドメインなどのマッピングも行った。また、精製した標品を用いて、Rif1分子の電子顕微鏡観察を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
さらに精製を行い不純物を除去し、濃度の高い標品を得て、電子顕微鏡で観察し、単粒子解析により形態を推定する。またDNAとの複合体を電子顕微鏡で観察しクロマチンループ構造の形成を実際に可視化できるか検討する。
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| Remarks |
http://www.igakuken.or.jp/genome/
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[Journal Article] NCOA4 Transcriptional Coactivator Inhibits Activation of DNA Replication Origins.2014
Author(s)
Bellelli, R., Castellone, M.D., Guida, T., Limongello, R., Dathan, N.A., Merolla, F., Cirafici, A.M., Affuso, A., Masai, H., Costanzo, V., Grieco, D., Fusco, A., Santoro, M., and *Carlomagno, F.
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Journal Title
Mol. Cell
Volume: 55
Pages: 123-137
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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