2015 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子レスキューマウスの解析によるNASHを制御する組織・細胞Nrf2の役割解明
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26282191
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳川 徹 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (10312852)
酒井 俊 筑波大学, 医学医療系, 講師 (30282362)
磯辺 智範 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (70383643)
蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 肥満 / 脂肪性肝炎 / 転写因子 / 酸化ストレス / インスリン抵抗性 / 遺伝子レスキューマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は，昨年度に引き続き組織特異的p62, Nrf2遺伝子ノックインマウスの作製を行った．昨年度作製したキメラマウスのうち，キメラ率の高い雄を野生型C57BL/6雌と交配しF1ヘテロマウスを得た．遺伝子型の判定は，尾端組織DNAを用いたPCR産物のパターンを解析して行った．ここで得られる遺伝子改変マウス（p62KI/KIおよびNrf2KI/KI）は，第2イントロンで転写がストップするため，全身でp62あるいはNrf2の発現が欠損する．これらのマウスを，既に作製済のp62-/-、Nrf2-/-、あるいは互いに交配して，p62KI/KI:Nrf2-/-，p62-/-:Nrf2KI/KI，p62KI/KI:Nrf2KI/KIマウスを得た（現在この段階を遂行中である）．これらのマウスは，全身でp62およびNrf2遺伝子二重欠損となり，NASHを発症する．平成2８年度は，p62，Nrf2の全身二重欠損下において，組織特異的にp62，Nrf2の発現をレスキューするために，上記マウスを組織特異的にCreリコンビナーゼを発現するマウスと交配する．これにより生まれる仔は，Creが発現する組織でのみLoxPで挟まれた転写終結シグナルおよびpolyA付加シグナルが除去され，p62あるいはNrf2の発現がレスキューされる組織特異的ノックインマウスとなる．本研究では，腸管上皮，肝細胞，骨髄系細胞（クッパー細胞），脂肪細胞特異的ノックインマウスを作製するために，それぞれLyz2-Cre，Albumin-Cre，CK19-Cre，aP2-Creマウスを用いる．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本学動物資源センターにおいて，Nrf2遺伝子レスキューマウスは順調に作製されている．ただし，マウスの繁殖に時間を要する問題がある．その対処法として，繁殖ケージを増やして繁殖を行なっている．現在，匹数は増えてきており，遺伝子レスキューが出来ているマウスから実験を行う予定である．
研究成果の一部は，国際学会にて成果報告を行った．
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| Strategy for Future Research Activity |
NASH発症機序に重要な組織を追求するために，DKOマウスの任意の組織・細胞において各遺伝子をレスキューしたマウスを作製し，DKOマウスと形質を比較し，その組織・細胞とNASH発症との関係を明らかにする．一連の研究結果を踏まえて，分子学的機構を解明することにより，どの臓器でどの遺伝子がNASH発症に深く関わっているかを明確にすることができる．
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Research Products
(14 results)
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[Journal Article] Lectin microarray-based sero-biomarker verification targeting aberrant O-linked glycosylation on mucin12015
Author(s)
Matsuda A, Kuno A, Nakagawa T, Ikegara Y, Irimura T, Yamamoto M, Nakanuma Y, Miyoshi E, Nakamori S, Nakanishi H, Viwatthanasittiphong C, Strivatanakul P, Miwa M, Shoda J, Narimatsu H.
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Journal Title
Anal Chem
Volume: 87
Pages: 7274-81
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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