2015 Fiscal Year Annual Research Report
トランスジェニック技術を用いたインフルエンザワクチンの効率的生産
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26289312
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
飯島 信司 名古屋大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (00168056)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小野 悦郎 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00160903)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | トランスジェニックニワトリ / インフルエンザ / シアル酸 / リコンビナーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. ヒトインフルエンザウイルス増殖用鶏卵の生産 ヒトインフルエンザワクチンの生産性の向上を目指し、奬尿膜の糖鎖修飾を改変したトランスジェニックニワトリの作製を行なっている。このため、α2,6結合型シアル酸転位酵素の遺伝子中にGFP遺伝子を挿入し、そのままでは活性のある酵素が発現しないトランスジェニックニワトリと、特異的に挿入配列を除去するリコンビナーゼphiC31を発現するトランスジェニックニワトリを作製し、これらのかけ合わせによってできた卵でのみ活性酵素が発現し、α2,6結合型シアル酸含有糖鎖が生成する安全なシステムの開発を行なっている。前年度はその毒性からphiC31遺伝子を導入したキメラニワトリの生存率が低く、トランスジェニックニワトリ作製まで至らなかったが、ウイルスベクターの改善などによりキメラニワトリの作製は可能となった。キメラニワトリの掛け合わせにより、phiC31および不活性型α2,6結合型シアル酸転位酵素を発現するトランスジェニックニワトリの取得を行なっているが、キメラニワトリ精子中のこれら遺伝子のコピー数が低いので目的のニワトリを得るのにしばらく時間が必要と考えられる。さらに、ニワトリにおけるO-型糖鎖生成に関与するシアル酸転位酵素を解析した。
2. ウイルス耐性の解除 インフルエンザウイルス耐性を司る分子のうちIFITM3について解析し、これらが奬尿膜で発現している事を確認した。
3. ウイルスのアッセイ インフルエンザウイルスのPA、PB1、PB2およびNP発現プラスミドとNP遺伝子の非翻訳領域の下流にレポーター遺伝子を挿入したプラスミドを構築し、細胞におけるインフルエンザウイルスRNAの転写複製活性の解析のためのレポーター遺伝子を用いたミニゲノムアッセイ系を確立した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
昨年度までの問題点を克服しキメラニワトリの作製までは順調にいっているが、得られたキメラニワトリの精子における導入遺伝子のコピー数が低い（導入遺伝子を持った精子の割合が低い）ため、全身に目的遺伝子を持つトランスジェニックニワトリの取得が遅れている。一方、ウイルス耐性や、ウイルスアッセイ法の開発は若干の遅れがあるもののほぼ予定通りである。
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| Strategy for Future Research Activity |
キメラニワトリが産卵をはじめたので、トランスジェニックニワトリを得るための掛け合わせを効率的に行なう。また、精子における遺伝子コピー数が低くトランスジェニック子孫を得るのに時間を要する事が予想されるため、新たなトランスジェニックニワトリの作製法を適用し少しでもプロセスを効率化する事を目指す。具体的には遺伝子を導入した始原生殖細胞を胚に移植し、トランスジェニックニワトリを作製する。このためにウイルスベクターを、非増殖細胞にも遺伝子導入が可能なレンチウイルスベクターに変更する。これらの方法で既にトランスジェニックニワトリを作製した経験があり、手法的には問題ないと考えられる。
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| Causes of Carryover |
in vitroにおけるインフルエンザウイルスRNAの転写複製活性の解析方法として、分泌型アルカリフォスファターゼをレポーター遺伝子とするミニゲノムアッセイ系の培養細胞株での確立に時間を要し、ニワトリ胎仔線維芽細胞でのミニゲノムアッセイ系の検討が遅れたため次年度使用額とした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
通常の培養細胞株よりも培養が困難なニワトリ胎仔線維芽細胞の培養用血清や、プラスミドの導入効率を高めるための遺伝子導入試薬の購入に使用する予定である。
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