2014 Fiscal Year Annual Research Report
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26291009
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
村田 武士 千葉大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (80415322)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | V-ATPase / 分子モーター / 構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１:AサブユニットのX線結晶構造解析---ヌクレオチド非結合型Aサブユニットの結晶構造を分解能2.5 Aで決定した。またソーキング法により過剰量のAMP-PNPを含む結晶化溶液を作製し、この結晶に長時間ソーキングした。結晶を回収し、シンクロトロン放射光を使って回折データを収集し、分解能2.7 Aで結晶構造を明らかにした。しかし得られた結晶構造にはAMP-PNPが結合していなかった。現在、共結晶化を試みている。
２:BサブユニットのX線結晶構造解析---以前の研究により、3.5 A 分解能でBサブユニット結晶のデータ収集に成功している。本年度は、X線結晶構造解析を進め、V1複合体のBサブユニット部分との分子置換法を検討し、その位相決定に成功した。現在X線結晶構造解析を継続している。
３:A1B1複合体のX線結晶構造解析--- A3B3複合体のリングを強固にしていると考えられるN末βバレル部位に変異を導入し、解離しやすい複合体を作製した。この変異体を用いて過剰量のAMP-PNP存在下で結晶化を行い、A1B1複合体と予想されるサンプルの結晶を得ることに成功した。現在構造解析を進めている。
４:変異A3B3複合体の作製及び機能構造解析--- A3B3複合体の構造形成に重要と考えられるBサブユニットのアルギニンフィンガーと呼ばれる残基（R350）に関して、部位特異的変異導入を行い、３種類の変異体を大量に精製した。現在、結晶化スクリーニングを行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初計画通り、Aサブユニットの結晶構造の決定、Bサブユニットの位相決定、A1B1の結晶化、A3B3複合体の変異体作製に成功している。このため予定通り順調に進展していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初計画に従って、各研究項目を継続する。ソーキング法で得ることが難しかったヌクレオチド結合型Aサブユニットについては、共結晶化法を試みる。
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| Causes of Carryover |
当初計画では水谷健二博士の雇用を予定していたが、本研究費が減額となり、年間を通じた雇用ができなかった。その代わりに年度後半から鈴木七緒博士を雇用したため次年度使用額が生じた。これによる研究の遅れは生じなかった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度の鈴木花野博士の人件費として使用する予定である。
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