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2014 Fiscal Year Annual Research Report

真の脱パルミトイル化酵素の同定と生理機能の解明

Research Project

Project/Area Number 26291045
Research InstitutionNational Institute for Physiological Sciences

Principal Investigator

深田 正紀  生理学研究所, 細胞器官研究系, 教授 (00335027)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywordsパルミトイル化 / 翻訳後修飾 / 脱パルミトイル化酵素 / 脂質修飾 / 酵素
Outline of Annual Research Achievements

パルミトイル化修飾は多くのシグナル蛋白質や膜蛋白質にみられる代表的な脂質修飾であり、蛋白質を特定の膜ドメインに輸送し、その局在や機能を制御する。パルミトイル化は他の脂質修飾とは異なり可逆的であり、リン酸化修飾と同様に、外界刺激に反応して細胞機能をダイナミックに制御している。近年、私共は哺乳動物においてパルミトイル化酵素群を世界に先駆けて単離し、様々な基質蛋白質に対する責任酵素を同定し、それらの生理機能と制御機構を明らかにしてきた。一方、パルミトイル化脂質修飾が発見されて35年以上を経ても、脱パルミトイル化反応を担う“真の責任酵素”は未だ明らかになっていない。本研究では1脱パルミトイル化酵素を探索、同定し、2その生理機能を明らかにして、パルミトイル化修飾機構の全容解明を目指す。今年度は、当初の研究計画を着実に遂行し、下記のような成果を得た。
私共は、脱パルミトイル化酵素がセリン加水分解酵素に属することに基づき、ラットおよびマウスの脳組織から38遺伝子を脱パルミトイル化候補酵素として単離し、遺伝子ライブラリーを作成した。次に、 [3H]パルミチン酸を用いた代謝ラベル法により代表的なパルミトイル化蛋白質であるPSD-95に対する脱パルミトイル化酵素活性を評価し、6個のPSD-95脱パルミトイル化酵素候補遺伝子群を得た。さらに、放射性同位元素を用いずに蛋白質パルミトイル化のストイキオメトリーを定量する手法を開発し、上記の脱パルミトイル化酵素候補遺伝子の酵素活性を簡便に定量的に測定することを可能とした。このように、本研究では当初の計画を順調に進め、予想以上の進捗と成果を得た。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

蛋白質パルミトイル化のストイキオメトリーを簡便に定量的に測定することができる新しい手法を開発したため。

Strategy for Future Research Activity

1)脱パルミトイル化酵素の基質特異性、活性制御機構の解明
平成26年度に単離・樹立した脱パルミトイル化酵素遺伝子ライブラリーと平成26年度に確立した放射性同位元素を用いずに蛋白質パルミトイル化のストイキオメトリーを定量する手法を用いて脱パルミトイル化酵素の基質特異性、酵素学的特性(分子活性、反応速度等)の詳細を明らかにする。
2)細胞レベルの脱パルミトイル化酵素の生理機能
6つの候補遺伝子の中から海馬神経細胞における生理的なPSD-95脱パルミトイル化酵素を同定し、その生理機能を明らかにする。

Causes of Carryover

事務上の支払い手続きが4月以降になったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

生じた次年度使用額は4月以降に支払われる予定であり、使用計画に変更はありません。

  • Research Products

    (20 results)

All 2015 2014 Other

All Journal Article (6 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results,  Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 1 results) Presentation (10 results) (of which Invited: 5 results) Book (1 results) Remarks (3 results)

  • [Journal Article] Postsynaptic nanodomains generated by local palmitoylation cycles2015

    • Author(s)
      Fukata M, Sekiya A, Murakami T, Yokoi N, Fukata Y
    • Journal Title

      Biochem Soc Trans

      Volume: 43 Pages: 199-204

    • DOI

      10.1042/BST20140238

    • Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] BAI1 regulates spatial learning and synaptic plasticity in the hippocampus2015

    • Author(s)
      Zhu D, Li C, Swanson AM, Villalba RM, Guo J, Zhang Z, Matheny S, Murakami T, Stephenson JR, Daniel S, Fukata M, Hall RA, Olson JJ, Neigh GN, Smith Y, Rainnie DG, Van Meir EG
    • Journal Title

      J Clin Invest

      Volume: 125 Pages: 1497-1508

    • DOI

      10.1172/JCI74603

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Chemical corrector treatment ameliorates increased seizure susceptibility in a mouse model of familial epilepsy2015

    • Author(s)
      Yokoi N, *Fukata Y, Kase D, Miyazaki T, Jaegle M, Ohkawa T, Takahashi N, Iwanari H, Mochizuki Y, Hamakubo T, Imoto K, Meijer D, Watanabe M, *Fukata M (*corresponding author).
    • Journal Title

      Nat Med

      Volume: 21 Pages: 19-26

    • DOI

      10.1038/nm.3759.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Identification and characterization of GABAA receptor autoantibodies in autoimmune encephalitis2014

    • Author(s)
      Ohkawa T, Satake S, Yokoi N, Miyazaki Y, Ohshita T, Sobue G, Takashima H, Watanabe O, *Fukata Y, *Fukata M (*corresponding author).
    • Journal Title

      J Neurosci

      Volume: 34 Pages: 8151-8163

    • DOI

      10.1523/JNEUROSCI.4415-13.2014.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Functional phylogenetic analysis of LGI proteins identifies an interaction motif crucial for myelination2014

    • Author(s)
      Kegel L, Jaegle M, Driegen S, Aunin E, Leslie K, Fukata Y, Watanabe M, Fukata M, Meijer D.
    • Journal Title

      Development

      Volume: 141 Pages: 1749-1756

    • DOI

      10.1242/dev.107995.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Non-Microtubular Localizations of Microtubule-Associated Protein 6 (MAP6)2014

    • Author(s)
      Gory-Faure S, Windscheid V, Brocard J, Montessuit S, Tsutsumi R, Denarier E, Fukata Y, Bosc C, Delaroche J, Collomb N, Fukata M, Martinou J, Pernet-Gallay K, Andrieux A.
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 9 Pages: e114905

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0114905.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] Specialized membrane nanodomain organized by lipid modification2015

    • Author(s)
      Fukata M, Sekiya A, Murakami T, Fukata Y
    • Organizer
      第92回日本生理学会大会
    • Place of Presentation
      神戸国際会議場・展示場(兵庫県神戸市中央区)
    • Year and Date
      2015-03-21 – 2015-03-23
    • Invited
  • [Presentation] てんかん原因遺伝子LGI1の先天的および後天的分子異常による脳機能障害2014

    • Author(s)
      深田優子、横井紀彦、深田正紀
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市西区)
    • Year and Date
      2014-11-25 – 2014-11-27
  • [Presentation] Synaptic organization regulated by palmitoylating and depalmitoylating enzymes of PSD-952014

    • Author(s)
      Fukata M
    • Organizer
      44th annual meeting of the Society for Neuroscience
    • Place of Presentation
      Washington, DC, USA
    • Year and Date
      2014-11-15 – 2014-11-19
    • Invited
  • [Presentation] Pathological roles of autoantibodies to synaptic proteins in encephalitic2014

    • Author(s)
      Fukata Y., Ohkawa T., Satake S., Yokoi N., Watanabe M., Fukata M.
    • Organizer
      44th annual meeting of the Society for Neuroscience
    • Place of Presentation
      Washington, DC, USA
    • Year and Date
      2014-11-15 – 2014-11-19
  • [Presentation] ポストシナプスに局在する脱パルミトイル化酵素の同定と性状解析2014

    • Author(s)
      関谷敦志、村上達郎、小林憲太、深田優子、深田正紀
    • Organizer
      第87回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会館(京都府京都市左京区)
    • Year and Date
      2014-10-15 – 2014-10-18
  • [Presentation] LGI1分子の役割と自己抗体の作用機序2014

    • Author(s)
      深田正紀、大川都史香、横井紀彦、深田優子
    • Organizer
      第48回てんかん学会学術集会
    • Place of Presentation
      京王プラザホテル(東京都新宿区)
    • Year and Date
      2014-10-02 – 2014-10-03
    • Invited
  • [Presentation] Postsynaptic nanodomains generated by local palmitoylation cycles2014

    • Author(s)
      Fukata M
    • Organizer
      Biochemical Society Focused Meeting
    • Place of Presentation
      Edinburgh, UK
    • Year and Date
      2014-09-12 – 2014-09-14
    • Invited
  • [Presentation] Molecular mechanisms of LGI1 mutation-related epilepsy and new strategy for human epilepsy2014

    • Author(s)
      Yokoi N., Fukata Y., Kase D., Miyazaki T., Jaegle M., Imoto K., Meijer D., Watanabe M., Fukata M.
    • Organizer
      第37回日本神経科学大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市西区)
    • Year and Date
      2014-09-11 – 2014-09-13
  • [Presentation] Exploration of depalmitoylating enzymes regulating bi-directional trafficking of small GTPase HRas2014

    • Author(s)
      Murakami T, Sekiya A, Fukata Y, Fukata M
    • Organizer
      第37回日本神経科学大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市西区)
    • Year and Date
      2014-09-11 – 2014-09-13
  • [Presentation] 免疫性脳炎:自己抗体によるシナプス機能異常2014

    • Author(s)
      深田正紀
    • Organizer
      第44回(2014)新潟神経学夏期セミナー
    • Place of Presentation
      新潟大学脳研究所 (新潟県新潟市中央区)
    • Year and Date
      2014-08-01 – 2014-08-02
    • Invited
  • [Book] 細胞工学2015

    • Author(s)
      横井紀彦、深田優子、深田正紀
    • Total Pages
      85 (512-513)
    • Publisher
      学研メディカル秀潤社
  • [Remarks] 生理学研究所 生体膜研究部門ホームページ

    • URL

      http://www.nips.ac.jp/fukata/

  • [Remarks] 生理学研究所 プレスリリース

    • URL

      http://www.nips.ac.jp/release/2014/12/post_285.html

  • [Remarks] ライフサイエンス新着論文レビュー

    • URL

      http://first.lifesciencedb.jp/archives/9607

URL: 

Published: 2016-06-01  

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