2014 Fiscal Year Annual Research Report
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26292038
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
金井 保 京都大学, 工学(系)研究科(研究院), 講師 (10346083)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 超好熱菌 / アーキア / 転写 / 微生物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1) 新規転写制御因子のin vitro機能解析
大腸菌in vitroタンパク質合成系を用いて作製した、T.kodakarensis推定転写制御因子ライブラリ－を用いたスクリーニングにより、Rubisco遺伝子のプロモーター領域に結合するTK1494などを見出した。TK1494については、組換えタンパクを作製し、精製を行った。
2) TK0271のin vitro機能解析
TK0271タンパク質を大腸菌を用いて調製し、精製タンパク質を用いて芳香族アミノ酸生合成系のpromoterに対してEMSAを行った。その結果、いずれのpromoterに対しても複合体形成が観察された。更に、これらのpromoterに含まれる回文配列に変異を導入したところ、複合体が形成されなくなったことから、TK0271の結合には回文配列が必須であることが明らかになった。次に最近構造や細胞内での機能を明らかにしたT. kodakarensisのRNA polymerase (RNAP)やTFBを含む、基本転写因子(RNAP, TFB, TBP)から構成されるin vitro転写系にTK0271を添加し、転写反応に与える影響を調べた。その結果、trp promoterの転写産物量はTK0271の添加により増加した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予想通りにTK1494などの新規転写制御因子が同定され、また先に同定された新規転写制御因子TK0271のin vitroにおける機能解析が順調に進んでいるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
新規転写制御因子TK1494のin vitro機能解析を進める。
TK0271遺伝子破壊株を作製し、そのアミノ酸合成能の比較などを行う。
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Research Products
(5 results)
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[Journal Article] Different roles of two transcription factor B proteins in the hyperthermophilic archaeon Thermococcus kodakarensis.2014
Author(s)
Hidase,R., R.Nishikawa, L.Gao, M.Katano, T.Imai, S.Kato, T.Kanai, H.Atomi, T.Imanaka, S.Fujiwara
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Journal Title
Extremophiles
Volume: 18 (3)
Pages: 573-588
DOI
Peer Reviewed
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