2015 Fiscal Year Annual Research Report
ロドコッカス・エクイ病原遺伝子群(Vap family)の網羅的探索
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26292153
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
高井 伸二 北里大学, 獣医学部, 教授 (80137900)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
角田 勤 北里大学, 獣医学部, 准教授 (80317057)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ロドコッカス・エクイ / 病原性 / 遺伝子 / 細菌感染症 / 馬 / 肺炎 / 網羅的解析 / プラスミド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Rhodococcus equiは、1～3ヵ月齢の仔馬の化膿性肺炎の原因となるグラム陽性球桿菌である。強毒株は病原性プラスミドを保有し、プラスミド上のpathogenicity island(PAI)にコードされる毒力関連抗原VapAをマクロファージ内で発現することで毒力を示す。本研究では20種類の強毒株病原性プラスミド型を一つのPCR反応系に複数のプライマー対を同時使用するMultiplex PCRを応用し､より簡便で迅速なPCR型別法を開発した｡日本の強毒株に存在する90kbⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、87Ⅱa～e型を型別するために作成された4種のプライマー対を同時に使用した反応系では6種類のPCR型が出現し、87kbⅡcとⅡd型が2つの特異的PCR型を示し、残り18種類は4種類のPCR型に大別された。欧米型である85kbⅠ～Ⅵ、87kbⅠ、Ⅲ、52kb型と日本、韓国型の90kbⅡ、Ⅴ型を型別するために作成された6種のプライマー対を同時に使用した反応系では10種類のPCR型が出現し、85kbⅡ、Ⅴ、90kbⅡ、Ⅳ、Ⅴ、52kb型は6つの特異的PCR型を示し、残り14種類は4種類のPCR型に大別された｡20種類中8種の病原性プラスミドは1回のMultiplex PCRにより型別可能となった｡この開発により､短時間で簡便な強毒株病原性プラスミド型別が可能となったが、大別された中には点変異のみでの相違を含むものがあり、PCR型別は難しいため制限酵素EcoRⅠ等で型別する必要がある。今後、強毒株病原性プラスミドの遺伝子変異部の解析やプライマーの新規構築により本法の改良を進め、ミミズ腸管内から分離される遺伝子の網羅的解析のためのツールとなるように検討したい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画に沿って、概ね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
強毒株は病原性プラスミド上のpathogenicity island(PAI)にコードされる毒力関連抗原VapAをマクロファージ内で発現することで毒力を示す。VapAの発現は様々な環境因子によって制御されており、現在、PAIにコードされている転写制御因子に関する検討も同時に進めいてる。網羅的解析と共にターゲットとする遺伝子の絞り込みにより、PAIの起源となる遺伝子の検索が進めばと考えている。
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