2016 Fiscal Year Annual Research Report
Mechanistic insight into CCR4-NOT deadenylase-mediated heart function control and its potential application for therapeutics
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26293050
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| Research Institution | Akita University |
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Principal Investigator |
久場 敬司 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10451915)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | CCR4-NOT / 心不全 / デアデニレース / オートファジー / ネクローシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題達成のために平成28年度は下記の検討を行った。
１）内因性Cnot1蛋白と会合するRNA認識分子の探索：CCR4-NOT複合体によるRNA制御機構を解明するため、CRISPR/Cas9ゲノム編集によるCnot1のFlagタグ付加を行い、内因性のCnot1蛋白のプルダウン、質量分析による結合蛋白の解析を行った結果、RNA認識蛋白群を同定することができた。これらのRNA認識蛋白についてPAR-CLIPの予備検討を行った。
２）CCR4-NOTによるオートファジー分子制御機構の解析：心臓特異的なCnot3欠損マウスの心不全死の原因のひとつとしてAtg7によるオートファジー非依存的な細胞死が重要であり、その細胞死のメカニズムとしてネクローシスとアポトーシスの両方がおきていることが分かった。Atg7がこれらの細胞死に寄与する分子の転写制御にかかわることがChIP解析から明らかになった。さらに、CCR4-NOTはAtg7 mRNAの安定性制御、翻訳制御を介してAtg7の発現を調節することが分かった。
３）CCR4-NOTデアデニレース阻害剤の候補物質のスクリーニング：in silicoでのデアデニレース因子の活性中心に結合する化合物のスクリーニングを行い、得られた候補物質についてin vitroでのデアデニレース蛋白を用いたアッセイでのスクリーニングを行ったところ候補阻害物質を得ることができた。しかしながら、活性中心への候補阻害物質の特異的結合を確認することができなかった。
４）新規CCR4-NOT関連因子の遺伝子欠損マウスの作製：生理機能が不明なデアデニレース遺伝子について、CRISPR/Cas9ゲノム編集により作製した2系統の遺伝子変異ES細胞の個体化を進めた。また、CCR4-NOT関連の蛋白修飾因子について機能欠失型のノックインマウスを作製した。
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| Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] ELABELA - APJ axis protects from pressure overload heart failure and Angiotensin II-induced cardiac damage.2017
Author(s)
Sato T, Sato C, Kadowaki A, Watanabe H, Ho L, Ishida J, Yamaguchi T, Kimura A, Fukamizu A, Penninger JM, Reversade B, Ito H, Imai Y, Kuba K*
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Journal Title
Cardiovascular Research
Volume: 印刷中
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Vps34 regulates myofibril proteostasis to prevent hypertrophic cardiomyopathy.2017
Author(s)
Kimura H, Eguchi S, Sasaki J, Kuba K, Nakanishi H, Takasuga S, Yamazaki M, Goto A, Watanabe H, Itoh H, Imai Y, Suzuki A, Mizushima N, Sasaki T*
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Journal Title
JCI Insight
Volume: 2
Pages: e89462
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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