2014 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子改変オルガノイドを用いたヒト大腸がん遺伝子の機能的解析基盤の構築
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26293177
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
佐藤 俊朗 慶應義塾大学, 医学部, 特任准教授 (70365245)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 下部消化管学 / 大腸がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
次世代シークエンス技術の進歩により, 網羅的ながん遺伝子変異同定が可能になった．しかしながら，発がんに寄与するドライバー遺伝子変異の同定はバイオインフォマティクスによるin sillico解析に依存してきた．我々は，大腸上皮組織を体外でミニ組織化し，複数の遺伝子を同時に破壊する，ヒト大腸上皮ノックアウト技術を確立した．本技術を用い，大腸がんの3%程度以上に認める25個の遺伝子を様々な組み合わせでノックアウトまたは変異ノックインし，人工大腸がんの作製およびその細胞生物学的特性の解析を行う．構築されるドライバー遺伝子機能解析基盤は汎用性が高く，様々な創薬スクリーニング応用が期待でき，高い社会的波及効果を併せ持つ．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
5個の大腸がんに高頻度に認められる遺伝子変異を標的としたCRISPR-Cas9ベクターと遺伝子変異ノックインドナーベクターの作製を行い，ヒト正常大腸オルガノイドに対するエレクトロポレーションによる遺伝子ノックアウトまたは遺伝子変異ノックインを行った．遺伝子変異はSurveyor assayおよびシークエンス解析により確認を行った．遺伝子改変オルガノイドは異種移植により腫瘍形成を認め論文報告を行った（Matano et al. Nature Medicine 2015）. さらに，20個の遺伝子に対するCRISPR-Cas9ベクターの作製を完了し, ヒト大腸オルガノイドへエレクトロポレーション，Surveyor assayによる遺伝子ノックアウトを確認した．現在までに，実験計画通り，順調に実験目標が達成されていると考えられる．
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの研究計画通りに研究は遂行されており，また，当該研究室でこれまでに蓄積されたオルガノイド技術のノウハウを有効利用することにより，順調に研究を推進できると考えている．
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| Causes of Carryover |
効率的な物品の調達を行った結果である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本研究計画が効率よく遂行するよう、次年度適正に使用を行う予定である。
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[Journal Article] Classical Th1 cells obtain colitogenicity by co-existence of RORγt-expressing T cells in experimental colitis.2014
Author(s)
Saigusa K, Hisamatsu T, Handa T, Sujino T, Mikami Y, Hayashi A, Mizuno S, Takeshita K, Sato T, Matsuoka K, Kanai T.
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Journal Title
Inflamm Bowel Dis.
Volume: 20(10)
Pages: 1820-7
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Cross-talk between RORγt+ innate lymphoid cells and intestinal macrophages induces mucosal IL-22 production in Crohn's disease.2014
Author(s)
Mizuno S, Mikami Y, Kamada N, Handa T, Hayashi A, Sato T, Matsuoka K, Matano M, Ohta Y, Sugita A, Koganei K, Sahara R, Takazoe M, Hisamatsu T, Kanai T.
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Journal Title
Inflamm Bowel Dis.
Volume: 20(8)
Pages: 1426-34
DOI
Peer Reviewed
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