2015 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子改変オルガノイドを用いたヒト大腸がん遺伝子の機能的解析基盤の構築
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26293177
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
佐藤 俊朗 慶應義塾大学, 医学部, 准教授 (70365245)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 大腸癌 / 浸潤 / 転移 / オルガノイド / 幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
次世代シークエンス技術の進歩により, 網羅的ながん遺伝子変異同定が可能になった．しかしながら，発がんに寄与するドライバー遺伝子変異の同定はバイオインフォマティクスによるin sillico解析に依存してきた．我々は，大腸上皮組織を体外でミニ組織化し，複数の遺伝子を同時に破壊する，ヒト大腸上皮ノックアウト技術を確立した．本技術を用い，大腸がんの3%程度以上に認める25個の遺伝子を様々な組み合わせでノックアウトまたは変異ノックインし，人工大腸がんの作製およびその細胞生物学的特性の解析を行う．構築されるドライバー遺伝子機能解析基盤は汎用性が高く，様々な創薬スクリーニング応用が期待でき，高い社会的波及効果を併せ持つ．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
5個の大腸がんに高頻度に認められる遺伝子変異を標的としたCRISPR-Cas9ベクターと遺伝子変異ノックインドナーベクターの作製を行い，ヒト正常大腸オルガノイドに対するエレクトロポレーションによる遺伝子ノックアウトまたは遺伝子変異ノックインを行った．遺伝子変異はSurveyor assayおよびシークエンス解析により確認を行った．遺伝子改変オルガノイドは異種移植により腫瘍形成を認め論文報告を行った（Matano et al. Nature Medicine 2015）. さらに，20個の遺伝子に対するCRISPR-Cas9ベクターの作製を完了し, ヒト大腸オルガノイドへエレクトロポレーション，Surveyor assayによる遺伝子ノックアウトを確認し, 異種移植実験による浸潤・転移能の変化を検証している．現在までに，実験計画通り，順調に実験目標が達成されていると考えられる．
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの研究計画通りに研究は遂行されており，また，当該研究室でこれまでに蓄積されたオルガノイド技術のノウハウを有効利用することにより，順調に研究を推進できると考えている．
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Research Products
(22 results)
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[Journal Article] EHBP1L1 coordinates Rab8 and Bin1 to regulate apical-directed transport in polarized epithelial cells.2016
Author(s)
Nakajo A, Yoshimura SI, Togawa H, Kunii M, Iwano T, Izumi A, Noguchi Y, Watanabe A, Goto A, Sato T, Harada A.
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Journal Title
The Journal of Cell Biology.
Volume: 3
Pages: 1474-1485
DOI
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[Journal Article] Ink4a/Arf-dependent Loss of Parietal Cells Induced by Oxidative Stress Promotes CD44-dependent Gastric Tumorigenesis.2015
Author(s)
Seishima R, Wada T, Tsuchihashi K, Okazaki S, Yoshikawa M, Oshima H, Oshima M, Sato T, Hasegawa H, Kitagawa Y, Goldenring JR, Saya H, Nagano O.
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Journal Title
Cancer Prev Res.
Volume: 8
Pages: 492-501
DOI
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