2015 Fiscal Year Annual Research Report
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26293247
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
野阪 哲哉 三重大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30218309)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | MLL / 白血病幹細胞 / MLL-ENL / PLZF |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々の研究で開発したMLL-ENL誘導発現型トランスジェニックマウスは幹細胞白血病のモデルマウスとして有用であり、転写因子PLZFが白血病幹細胞の生成に重要な役割を担っていることが判明した。 その後、PLZFの下流でがん化に重要な役割を担う候補遺伝子Xを同定し、Xの強制発現は造血細胞を不死化することを明らかにした上で、PLZFによる遺伝子Xの転写調節機構の解析を開始した。
平成27年度は遺伝子Xのプロモーター領域を用いたルシフェラーゼアッセイによりPLZFがXの転写を正に調節していることを明らかにした。さらに、FlagつきのPLZFの強制発現により不死化した造血細胞と抗Flag抗体を用いたクロマチン免疫沈降アッセイによりPLZFがX遺伝子のプロモーター領域に結合していることも確認した。また、shRNAを発現するレトロウイルスベクターを用いた遺伝子Xのノックダウン実験を行ったところ、PLZFによるコロニー形成は抑制され、遺伝子XがPLZFによる自己複製亢進作用において重要な機能を持つことがわかった。また、急性前骨髄球性白血病の原因遺伝であるPLZF-RARAの強制発現は遺伝子Xの発現を上昇させた。
Xは細胞質と核内に局在することが知られているので、Xをエストロゲン受容体との融合蛋白としてタモキシフェン処理で細胞内局在を変えると、核内局在依存性に造血細胞を不死化した。Xは転写制御因子であり、予想通りの結果であるが、Xは翻訳後修飾の機能も有するので、核内の相互作用分子の機能修飾の観点からもさらなる解析が必要である。
生体内の機能解析に関しては、PLZF単独ではマウス骨髄移植実験では白血病を誘導できないので、現在、PLZF-RARAによる白血病発症の実験系を用いて遺伝子Xのノックダウン効果を解析している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
あと1年残し、順調に結果が得られており、ここまでの進展は予定通りと言える。今後の最大の難関はマウス生体内での遺伝子Xの機能解析と思われる。
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| Strategy for Future Research Activity |
生体内でのPLZF-RARAによる白血病誘導の実験系はあまり知られておらず、導入遺伝子の発現レベルが重要であることに気づくのに時間を要したが、白血病発症モデルの樹立に成功しつつある。今後は遺伝子Xのノックダウンがどれだけ影響するか、様々な条件下で入念に検討予定である。
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[Journal Article] Novel working hypothesis for pathogenesis of hematological malignancies; Combination of mutations-induced cellular phenotypes determines the disease (cMIP-DD).2016
Author(s)
Kitamura T, Okochi-Watanabe N, Enomoto Y, Nakahara F, Oki T, Komeno Y, Kato N, Doki N, Uchida T, Kagiyama Y, Togami K, Kawabata KC, Nishimura K, Hayashi Y, Nagase R, Saika M, Fukushima T, Asada S, Fujino T, Izawa Y, Horikawa S, Fukuyama T, Tanaka Y, Ono R, Goyama S, Nosaka T, Kitaura J, Inoue D.
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Journal Title
J Biochem
Volume: 159
Pages: 17-25
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Presentation] Essential role of inducible bronchus-associated lymphoid tissue genesis for the induction of antigen-specific immune response by Ag85B-hPIV2-based anti-tuberculosis vaccine in mice.2016
Author(s)
Nagatake T, Wada Y, Matsumoto N, Shimojou M, Hirata S, Nasu A, Suzuki H, Hosomi K, Ogami K, Tsujimura Y, Kawano M, Nosaka T, Yasutomi Y, Kunisawa J.
Organizer
第9回次世代アジュバント研究会
Place of Presentation
千里ライフサイエンスセンター（大阪府・豊中市）
Year and Date
2016-01-19
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