2015 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
26293423
|
|---|
| Research Institution | Hokkaido University |
|---|
Principal Investigator |
東野 史裕 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 准教授 (50301891)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北村 哲也 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (00451451)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | アデノウイルス / 口腔がん / 腫瘍 / 溶解 / ＡＲＥ－ｍＲＮＡ |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、腫瘍細胞、特に口腔がん細胞では増殖可能で最終的には細胞を溶解し、正常細胞では増殖できず何の影響も与えない腫瘍溶解アデノウイルスを開発することである。アデノウイルスのE4領域にコードされているタンパクは、ウイルスの増殖に必須で、ARE-mRNAを核外輸送・安定化することによりウイルスを複製に導く。そこで、E4を欠損したアデノウイルス（AdΔE4）でも、あらかじめARE-mRNAが核外輸送・安定化しているがん細胞では増殖でき、ARE-mRNAが核内にある正常細胞では増殖できないと考えた。本研究ではこのウイルスの口腔がんに対する腫瘍溶解効果を検討することを目的とする。
本年度は、AdΔEの効果を動物を用いてin vivoで解析した。ヌードマウスに移植したがん細胞（HeLa、A549）に、腫瘍に直接AdΔEを投与することにより腫瘍溶解効果を検討した。ウイルスを投与した群では、時間経過とともに腫瘍が縮小するか、もしくは腫瘍の増大が抑制されたのに対して、コントロール群（ウイルスが入っていないPBSを投与した群）では、移植した腫瘍が増大し続けた。また、5匹に1匹程度の割合でAdΔEによる腫瘍の消失が見られた。次に、腹腔内に腫瘍を形成し、AdΔEを腹腔内投与し、腫瘍の大きさを観察した結果、同様にウイルス投与群では腫瘍の縮小が見られた。さらに、同様に腹腔内腫瘍にAdΔEを投与しマウスの生存率を検討した結果、ウイルス投与群の方が生存率は高かった。これらの結果は、AdΔEにより腫瘍の増大が抑制され、生存率が高くなることを示している。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は、我々が開発中の腫瘍溶解アデノウイルスの口腔がんに対する効果をヌードマウスを用いてin vivoで解析した。当初、ヌードマウスの皮下に腫瘍を形成できず困惑したが、時間を要すれば腫瘍が増大することが明らかになった。また、腫瘍に直接ウイルスを注入する手法で腫瘍縮小効果が見られたが、効果を発揮するまでも時間がかかることも解明された。さらに、最近腹腔内に腫瘍細胞を注入すると、皮下に細胞を移植するよりかなり早く腫瘍が形成されることもわかり、この手法を用いてカプランーマイヤ法で生存率を求めることができた。いずれの手法でも、AdΔEは腫瘍縮小効果を持つことがわかり、AdΔEの臨床応用のための基本となるデータが得られたと考えている。これらの研究は、当初の研究計画に則して行われ、ほぼその計画通りに結果が出せた。従って、おおむね順調に進展していると考える。
|
| Strategy for Future Research Activity |
平成28年度は、「腫瘍溶解アデノウイルスと抗がん剤との併用効果」、「転移活性が高いがんへのAdΔEの効果」「新しいウイルス作成」を行う。
1. これまでに様々ながんで腫瘍溶解アデノウイルスとシスプラチンとの併用が検討されている。そこでシスプラチンなどの抗がん剤とAdΔEとの併用を次の方法で検討する。口腔がん細胞を用いて、AdΔE4とシスプラチンを投与し、腫瘍溶解効果が相乗的に活性化されるか検討する。次に、我々の研究室でクローニングされたシスプラチン抵抗性口腔がん細胞を用いて同様の検討を行う。さらに、抗がん剤が効かないがん幹細胞を用いて同様の検討を行い、AdΔE4がシスプラチンの効果を増強するか、もしくはAdΔE4単独でも十分な腫瘍溶解効果があるか確認する。
2. 転移活性の高い口腔がん細胞を用いてAdΔE4の効果を検討する。転移活性の高い口腔がん細胞（HSC3など）と低い細胞（Ca.9.22など）を用いて、AdΔEの腫瘍溶解効果を検討する。また、その効果を現在実用されている腫瘍溶解アデノウイルス（ONYX-015）で得られた結果と比較する。
3. より効果の高い腫瘍溶解アデノウイルスの作成。口腔がんで高い発現を示すPim1遺伝子のプロモーターをAdΔE4のE1A遺伝子の上流に挿入し、高い口腔がん細胞内ではE1Aを多く転写するようなウイルスを作成する。また、AdΔE4と他の腫瘍溶解効果を持つアデノウイルスとの融合ウイルスを作成し、それらの効果を検討する。
|
| Causes of Carryover |
本年度後半は、動物実験室の移動があり、購入予定の動物を含む動物実験関係のための予算執行が遅れた。また、後半動物の生存率を検討するために、これまで行っていなかった腫瘍細胞の腹腔内投与を行い腫瘍形成を試みたため、腫瘍形成のために予想以上の時間がかかった。そのため動物関係の予算執行に若干時間がかかった。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
今後は、昨年度に引き続き動物関連の資料を購入する予定である。そしてさらに、今年度の計画中のシスプラチン購入に用いる予定である。
|
