2016 Fiscal Year Annual Research Report
Development of fluorogenic probe for gene-analisis utilizing novel silylated fluorescent material
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26410173
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
篠塚 和夫 群馬大学, 大学院理工学府, 教授 (20206105)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
井上 裕介 群馬大学, 大学院理工学府, 准教授 (90304302)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 蛍光性オリゴDNA / シリル化ピレン / シリル化ペリレン / モレキュラービーコン / 一塩基ミスマッチ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
①平成２６年度研究において開発した、シアノ基を持つ高発光型シリル化ピレンについて、置換位置の異なる２種類のシアノ基修飾シリル化ピレンを合成し、これらを当初計画に従ってクリック反応を用いてオリゴDNA中に導入可能な、アジド基結合型誘導体へと変換した。これらを予めアルキニル基を持つ非ヌクレオシド性スカホールドを3'末端付近及び5'末端に導入した修飾DNAと反応させて、ステム中の隣接した２カ所にシアノ基修飾シリル化ピレンを持つ２種類のモレキュラービーコンプローブを作成した。これらのプローブでは相補鎖非存在下で観察される顕著なエキシマー発光が、相補鎖存在下でのみ大きく減少することが観察された。
②平成２７年度に引き続き、ヒトパピローマウイルス遺伝子診断用プローブとして、C-5位アントラキノン結合デオキシウリジン残基及びC-5シリル化ペリレン結合デオキシウリジン残基を併せ持つモレキューラービーコンプローブについて、強毒性のHPV16及びHPV18のそれぞれに相補的な２種のプローブを合成し、標的DNA存在下及び非存在下での蛍光挙動を測定した。その結果いずれのプローブも標的存在下でのみその蛍光強度が大きく（１４～２６倍）増強することを確認した。また、HPV16用プローブとHPV18用プローブ何れにおいても、蛍光の増大は特異的標的鎖存在下の場合だけであり、他の標的との交差反応を示さない、特異性の高いプローブであることを確認した。
以上の成果に付いては国内及び国際学会で発表した。
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