診断・治療法開発に向けた新規大腸癌バイオマーカー候補タンパク質の網羅的機能解析

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26430152
• Research Institution: National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition
• Principal Investigator: 原 康洋 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, プロテオームリサーチプロジェクト, 特任研究員 (70568617)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 久米 秀明 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, プロテオームリサーチプロジェクト, 特任研究員 (50322714) ; 朝長 毅 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, プロテオームリサーチプロジェクト, プロジェクトリーダー (80227644)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 大腸癌 / バイオマーカー / 膜タンパク質

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、当研究室で行ったプロテオーム解析によってすでに大腸癌での高発現が見出されている膜タンパク質群に関して、癌発生、進行との関連を調べ大腸癌バイオマーカーあるいは創薬標的としての機能的な裏づけを得ることを目的としている。
平成27年度は、平成26年度に大腸癌細胞株での発現量を指標に候補として設定し解析を行った16タンパク質に加え、新たに新規性が高いと考えられる５タンパク質に関して大腸癌細胞を用いたsiRNAトランスフェクションによるノックダウンを行った。ノックダウン後の機能解析法として細胞増殖アッセイ、wound healingによる移動能アッセイ、matrigel invasion chamberによる浸潤能アッセイの3通りを行った。また同時に平成26年度に行った機能解析実験で大腸癌進行に関わる可能性に関してボーダーラインと判断された3タンパク質のsiRNA配列を変えた再試験も試みた。
その結果、今回調べたタンパク質の中からは大腸癌の発生、進行に強く関わると示唆されるものは得られなかった。
そこで平成26年度の機能解析実験ですでに大腸癌発生、進行に関わることが見出されていた2種類のタンパク質に着目し、さらなる解析を行った。その一つであるグルタチオン代謝関連タンパク質は正常細胞HEK293でのノックダウンでは増殖が変化せず、ノックダウンによる増殖抑制効果は大腸癌細胞に特異性が高いことがわかった。現在、この二つのタンパク質に関してさらに大腸癌の発生、進行との関連を調べている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当研究室で見出された大腸癌関連タンパク質について細胞を用いたsiRNA導入による癌進展機能の各種アッセイを行い、バイオマーカー候補となるタンパク質を絞り込むことができた。

Strategy for Future Research Activity

平成28年度は、大腸癌細胞株を用いたスクリーニングで絞り込んだ2種類のバイオマーカー候補タンパク質に関して、機能解析実験を引き続き行う。