2014 Fiscal Year Research-status Report
肺癌におけるcMetによるtopoisomeraseIの活性制御の解析
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26430159
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
笠原 寿郎 金沢大学, 医学系, 准教授 (30272967)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
曽根 崇 金沢大学, 医薬保健学総合研究科, 特任准教授 (30420334)
木村 英晴 金沢大学, 医学系, 助教 (40444202)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | cMet / Topoisomerase I |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は肺癌細胞における増殖因子受容体cMetと核内DNA複製酵素のTopoisomeraseI(TopoI)の関連について検討した。検討に用いたのは10種類の肺癌培養細胞株(PC-9, PC-9/Met, H1975, A549, H358, EBC-1, H441, H1993, H596, H2228)である.
まずcMet蛋白発現、リン酸化をWestern blot法で検討したところ、5細胞株(PC-9/Met, EBC-1, H1993, H441, H2228)でcMet高発現、Metのリン酸化亢進を認めた。その他の5種類ではcMet発現は弱くリン酸化も低かった。核内のTopoI発現・活性を検討したところ、前者のcMet高発現細胞株群ではTopoI蛋白発現が高く、活性も亢進していた。TopoI阻害剤であるSN38に対する感受性はcMet高発現細胞群で高い傾向にあった。ここの細胞を別々に検討してもこの傾向は認められた。さらにcMet発現とリン酸化Metには強い関連が認められ、リン酸化MetとTopoI発現にも弱い関連が認められた。TopoI活性とcMet発現には関連は認められなかった。HGFはcMetのLigandである。PC-9, PC-9/Met, A549, EBC-1細胞株にHGFを添加した実験では、Metリン酸化亢進が認められた。またMet阻害剤（SU11274）でHGF刺激によるMetリン酸化がキャンセルされた。この現象はcMet発現状況に関わらず認められた。一方 TopoI発現はSU11274処理により低下する傾向が認められたが、HGF刺激ではわずかに亢進したのみであった。
現在までの検討ではcMetとTopoIの間には関連が認められそうである。cMetがTopoIを制御している可能性は高いがTopoI活性制御にはまだいくつかのステップがあることが示唆される。今後下流シグナルの解析を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
我々の仮説であるcMetが直接的にTopoIの蛋白発現、活性を制御しているという仮説は証明されつつある。一方でこの知見を以下に臨床応用するか、という面ではTopoI発現とTopoI 阻害剤であるSN38感受性の間に弱い相関しか見られていないためcMetとのSN38感受性の関連は得られていない。一部のTopoI阻害剤はABCトランスポーターにより排泄されることが知られており、これらの影響があるのかもしれない。一方でHGFによるMet刺激、cMet阻害剤によるMetリン酸化阻害によりTopoI蛋白発現が変動していることは、我々の仮説を支持するものであり、さらに検討する価値があると考えられる。今回の検討期間内での進捗としてはおおむね順調であると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度以降の検討として、下記を予定している。すなわち、TopoI活性に影響している因子として、近年同定されているのがCK2、p14ARFである (。我々はEGFR-TKIの長時間の暴露によりCK2がupragulationされるというpreliminaryな結果を得ている。cMet高発現株群でCK2やp14ARFを介してTopoI活性を制御しているかを探索する。またcMetを刺激した場合のCK2, p14ARFの変化を確認する。さらに下流シグナルの解析を追加するためHGFによるMet刺激、阻害剤によるMet阻害状態でのシグナルアレイを用いて解析を追加する。また各細胞株からmiRNAを抽出する。現在までにTopoIと関連が報告されているmiRNAはmiR-24, miR34c, miR458, miR208bなどがあり、cMetと関連するものとして、miR-34a,b,c,miR-27a, miR-31など多く報告されている。PC-9,A549,PC-9/Met,EBC-1を用いて安定状態における網羅的なmiRNA arrayを用いる
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[Journal Article] (18)F-Fdg Uptake Predicts Diagnostic Yield of Transbronchial Biopsy in Peripheral Lung Cancer.2014
Author(s)
6.Umeda, Y., Y. Demura, M. Anzai, H. Matsuoka, T. Araya, M. Nishitsuji, K. Nishi, T. Tsuchida, Y. Sumida, M. Morikawa, S. Ameshima, T. Ishizaki, K. Kasahara, and T. Ishizuka.
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Journal Title
Lung Cancer
Volume: 85
Pages: 47-52
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Efficacy and Safety of Weekly Nab-Paclitaxel Plus Carboplatin in Patients with Advanced Non-Small Cell Lung Cancer."2014
Author(s)
5.Satouchi, M., I. Okamoto, H. Sakai, N. Yamamoto, Y. Ichinose, H. Ohmatsu, N. Nogami, K. Takeda, T. Mitsudomi, K. Kasahara, and S. Negoro.
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Journal Title
Lung Cancer
Volume: 81
Pages: 97-101
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Retrospective analysis of prognostic factors in non-small cell lung cancer with EGFR mutations.2014
Author(s)
Shingo Nishikawa, Takashi Sone, Taro Yoneda, Kazuhiko Shibata, Koji Kurokawa, Toshiyuki Kita, Hiroki Shirasaki, Kazuyoshi Watanabe, Hideharu Kimura, Kazuo Kasahara
Organizer
2014 ASCO Annual Meeting
Place of Presentation
Mccormick Place Chicago,USA
Year and Date
2014-05-30 – 2014-06-03
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[Presentation] Phase II study of erlotinib plus tivantinib in patients with EGFR-mutation–positive NSCLC who failed in immediately previous EGFR-TKI therapy2014
Author(s)
Tomonori Hirashima, Koichi Azuma, Nobuyuki Yamamoto, Toshiaki Takahashi, Makoto Nishio, Taizo Hirata, Kaoru Kubota, Kazuo Kasahara, Toyoaki Hida, Hiroshige Yoshioka, Kohei Suzuki, Shiro Akinaga, Kazuto Nishio, Tetsuya Mitsudomi, Kazuhiko Nakagawa
Organizer
2014 ASCO Annual Meeting
Place of Presentation
Mccormick Place Chicago,USA
Year and Date
2014-05-30 – 2014-06-03
