2014 Fiscal Year Research-status Report
組織の構造パターンを決定する細胞接着分子の構造生物学的研究
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26440028
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
鈴木 守 大阪大学, たんぱく質研究所, 准教授 (40280507)
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2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 細胞接着分子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
臓器や組織形成において、正しい細胞の空間的な配置は非常に重要である。最近、細胞の空間配置の制御はアドヘレンスジャンクション接着分子ネクチンにより担われていることが蛍光顕微鏡、RNAiを用いた実験により明らかにされつつある（Togashi らScience 2011）。しかし、実際に2種類の細胞の膜上に存在するネクチンが引き起こす空間的アレンジメントを原子構造レベルで理解する研究はいまだなされていない。そこで本研究では、内耳コルチ器において有毛細胞とその支持細胞が形成するチェックボードパターン形成に関与するネクチン１とネクチン３を代表とするヘテロフィリックトランス複合体の結晶構造解析を行い、細胞接着のメカニズムを原子レベルで明らかにすることを目的とする。
当初目的とした、ネクチン1とネクチン3のコンストラクトの作成および大量培養、精製法を確立した。結晶化、構造解析に成功したネクチン3の結晶構造について学会発表を行った。ネクチン1,3コンプレックスの結晶化を行った。結晶構造解析の結果、残念ながらネクチン3単体の結晶であることが判明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
昆虫細胞培養系を用いて、ネクチン1～4のNecl-1～5の細胞外領域の最適な培養条件の検討を行う。精製条件の確立および、ヘテロ複合体の状態でゲル濾過精製を行い、得られたサンプルを濃縮後、大規模結晶化スクリーニングに用いる。当初目的とした、ネクチン1とネクチン3のコンストラクトの作成および大量培養、精製法を確立した。ネクチン3の結晶構造を学会発表行った。ネクチン1,3コンプレックスの結晶化を行った。残念ながら、結晶構造解析の結果、ネクチン3単体の結晶であることが判明した。
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| Strategy for Future Research Activity |
ゲル濾過および表面プラズモン共鳴法を用いて、安定なヘテロ複合体として存在する溶液条件を検討し、結晶化を目指す。
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| Causes of Carryover |
細胞培養に使用する培地を他の研究室から譲り受けることができたため、支出を抑えることができた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
27年度に物品費として使用する。
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[Journal Article] Crystal structure of afadin PDZ domain-nectin-3 complex shows the structural plasticity of the ligand-binding site.2015
Author(s)
Fujiwara Y, Goda N, Tamashiro T, Narita H, Satomura K, Tenno T, Nakagawa A, Oda M, Suzuki M, Sakisaka T, Takai Y, Hiroaki H.
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Journal Title
Protein Sci.
Volume: 24
Pages: 376-385
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Grease matrix as a versatile carrier of proteins for serial crystallography.2014
Author(s)
Sugahara M, Mizohata E, Nango E, Suzuki M, Tanaka T, Masuda T, Tanaka R, Shimamura T, Tanaka Y, Suno C, Ihara K, Pan D, Kakinouchi K, Sugiyama S, Murata M, Inoue T, Tono K, Song C, Park J, Kameshima T, Hatsui T, Joti Y, Yabashi M, Iwata S.
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Journal Title
Nat Methods.
Volume: 12
Pages: 61-63
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] In vivo crystallography at X-ray free-electron lasers: the next generation of structural biology?2014
Author(s)
Gallat FX, Matsugaki N, Coussens NP, Yagi KJ, Boudes M, Higashi T, Tsuji D, Tatano Y, Suzuki M, Mizohata E, Tono K, Joti Y, Kameshima T, Park J, Song C, Hatsui T, Yabashi M, Nango E, Itoh K, Coulibaly F, Tobe S, Ramaswamy S, Stay B, Iwata S, Chavas LM.
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Journal Title
Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci.
Volume: 369
Pages: 1647
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Radically Different Thioredoxin Domain Arrangement of ERp46, an Efficient Disulfide Bond Introducer of the Mammalian PDI Family.2014
Author(s)
Kojima R, Okumura M, Masui S, Kanemura S, Inoue M, Saiki M, Yamaguchi H, Hikima T, Suzuki M, Akiyama S, Inaba K.
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Journal Title
Structure
Volume: 4
Pages: 431-443
DOI
Peer Reviewed
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