2015 Fiscal Year Research-status Report
組織の構造パターンを決定する細胞接着分子の構造生物学的研究
| Project/Area Number |
26440028
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
鈴木 守 大阪大学, たんぱく質研究所, 准教授 (40280507)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | Ｘ線結晶構造解析 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
臓器や組織形成において、正しい細胞の空間的な配置は非常に重要である。最近、細胞の空間配置の制御はアドヘレンスジャンクション接着分子ネクチンにより担われていることが蛍光顕微鏡、RNAiを用いた実験により明らかにされつつある（Togashi らScience 2011）。しかし、実際に2種類の細胞の膜上に存在するネクチンが引き起こす空間的アレンジメントを原子構造レベルで理解する研究はいまだなされていない。そこで本研究では、内耳コルチ器において有毛細胞とその支持細胞が形成するチェックボードパターン形成に関与するネクチン１とネクチン３を代表とするヘテロフィリックトランス複合体の結晶構造解析を行い、細胞接着のメカニズムを原子レ
ベルで明らかにすることを目的とする。
当初目的とした、ネクチン1とネクチン3のコンストラクトの作成および大量培養、精製法を確立した。今年度はネクチン１とネクチン３ヘテロフィリックトランス複合体の結晶化スクリーニングを行い、得られた結晶を用いて放射光施設のＸ線回折実験を行い、分子置換法により位相決定を行い、2.8オングストローム分解能で構造解析に成功した。得られた構造は新規構造であるマウスネクチン１のＤ１ドメインのホモダイマーであった。この結果を日本結晶学会年会においてポスター発表を行った。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
精製条件の確立および、ヘテロ複合体の状態でゲル濾過精製を行い、得られたサンプルを濃縮後、大規模結晶化スクリーニングに用いる。当初目的とした、ネクチン1とネクチン3のコンストラクトの作成および大量培養、精製法を確立した。ネクチン1の結晶構造を学会発表行った。ネクチン1,3コンプレックスの結晶化を行った。結晶を溶解させて行った電気泳動からコンプレックスと示唆される。
|
| Strategy for Future Research Activity |
27年度に得られた結晶を用いて回折実験を行い、構造解析を目指す。
|
| Causes of Carryover |
購入予定であった消耗品を他のグループから譲り受けることができたため。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
培養、精製、結晶化の消耗物品購入を行う。
|
-
[Journal Article] Redox-coupled proton transfer mechanism in nitrite reductase revealed by femtosecond crystallography.2016
Author(s)
Fukuda Y, Tse KM, Nakane T, Nakatsu T, Suzuki M, Sugahara M, Inoue S, Masuda T, Yumoto F, Matsugaki N, Nango E, Tono K, Joti Y, Kameshima T, Song C, Hatsui T, Yabashi M, Nureki O, Murphy ME, Inoue T, Iwata S, Mizohata E.
-
Journal Title
PNAS
Volume: 113
Pages: online
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
-
[Journal Article] Redox-coupled structural changes in nitrite reductase revealed by serial femtosecond and microfocus crystallography.2016
Author(s)
Fukuda Y, Tse KM, Suzuki M, Diederichs K, Hirata K, Nakane T, Sugahara M, Nango E, Tono K, Joti Y, Kameshima T, Song C, Hatsui T, Yabashi M, Nureki O, Matsumura H, Inoue T, Iwata S, Mizohata E.
-
Journal Title
J. Biochem
Volume: 未定
Pages: 未定
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Native sulfur/chlorine SAD phasing for serial femtosecond crystallography.2015
Author(s)
Nakane T, Song C, Suzuki M, Nango E, Kobayashi J, Masuda T, Inoue S, Mizohata E, Nakatsu T, Tanaka T, Tanaka R, Shimamura T, Tono K, Joti Y, Kameshima T, Hatsui T, Yabashi M, Nureki O, Iwata S, Sugahara M.
-
Journal Title
Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.
Volume: 71
Pages: 251-9-25
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] An isomorphous replacement method for efficient de novo phasing for serial femtosecond crystallography.2015
Author(s)
Atsushi Kodan, Tomohiro Yamaguchi, Tomohiro Murai, Keiko Gomi, Naoki Kajiyama, Eiichi Mizohata, Mamoru Suzuki, Eriko Nango, Kensuke Tono, Yasumasa Joti, Takashi Kameshima, Jaehyun Park, Changyong Song, Takaki Hatsui, Makina Yabashi, So Iwata, Hiroaki Kato, Hideo Ago, Masaki Yamamoto & Toru Nakatsu
-
Journal Title
Scientific Reports
Volume: 5
Pages: 14017
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Diverse application platform for hard X-ray diffraction in SACLA (DAPHNIS): application to serial protein crystallography using an X-ray free-electron laser2015
Author(s)
Kensuke Tono, Eriko Nango, Michihiro Sugahara, Changyong Song, Jaehyun Park, Tomoyuki Tanaka, Rie Tanaka, Yasumasa Joti, Takashi Kameshima, Shun Ono, Takaki Hatsui, Eiichi Mizohata, Mamoru Suzuki, Tatsuro Shimamura, Yoshiki Tanaka, So Iwata and Makina Yabashi
-
Journal Title
J. Synchrotron Rad.
Volume: 22
Pages: 532-537
DOI
Peer Reviewed
-
[Presentation] X線自由電子レーザーを用いた新規タンパク質の立体構造決定2016
Author(s)
山下恵太郎, 潘 東青, 奥田智彦, 菅原道泰, 小段篤史, 山口知宏, 村井智洋, 溝端栄一, 鈴木 守, 南後恵理子, 登野健介, 城地保昌, 亀島 敬, 初井宇記, 矢橋牧名, 岩田 想, 加藤博章, 吾郷日出夫, 山本雅貴, 中津 亨
Organizer
日本薬学会第136年会
Place of Presentation
パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
Year and Date
2016-03-26 – 2016-03-29
-
-
-
-
-
