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2014 Fiscal Year Research-status Report

膜小胞形成に関わる多量体膜タンパク質の構造解析と調節機構の解明

Research Project

Project/Area Number 26440034
Research InstitutionUniversity of Shizuoka

Principal Investigator

横山 英志  静岡県立大学, 薬学部, 講師 (70433208)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 橋本 博  静岡県立大学, 薬学部, 教授 (40336590)
Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywords膜結合プロテアーゼ / ストマチン / OBドメイン / X線結晶構造
Outline of Annual Research Achievements

本研究では、X線結晶構造解析により、膜小胞形成に関与し溶血性貧血(遺伝性有口赤血球症stomatocytosis)の原因タンパク質である多量体膜タンパク質ストマチンの全体構造解明とストマチンの機能制御パートナータンパク質STOPPによるストマチン制御機構の解明を目的とする。ストマチンの分子レベルでの構造と機能を明らかにすることで、未だ有効な治療薬のないstomatocytosisの治療薬を新規に開発するための構造基盤が得られる。
今年度は、STOPPによるストマチン制御機構の解明のため、STOPPのプロテアーゼドメインとストマチンとの複合体の構造決定を主に行った。これまで構造決定に成功しているものと異なる配列のストマチンペプチドを用いSTOPPのプロテアーゼドメインとの複合体の構造を決定した。その結果、STOPPプロテアーゼドメイン二量体が、これまで報告されている二量体構造と大きく異なるため、プロテアーゼは基質ストマチンの切断の際に二量体構造を大きく変化させることが明らかになった。さらにSTOPPのOB (Oligonucleotide Binding)ドメイン単体の構造解析に成功した。結晶構造からこのOBドメインは二量体を基本とした12-24量体のオリゴマーを形成できること、STOPP-ストマチン複合体における足場として機能しうることが明らかになった。
以上のようにSTOPPによるストマチン制御機構解明の研究は順調に進展している。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ストマチンの機能制御パートナータンパク質STOPPによるストマチン制御機構解明の研究では、2種類のX線結晶構造解析に成功しており、おおむね順調に進展している。

Strategy for Future Research Activity

ストマチンの機能制御パートナータンパク質STOPPのプロテアーゼドメインが基質ストマチンを切断する段階の複合体構造が明らかになっていないため、引き続きSTOPP-基質ストマチンペプチド複合体の結晶化と構造解析を進める。またプロテアーゼにより切断されず結合するストマチン(阻害ストマチン)とSTOPPプロテアーゼドメインとの複合体の結晶化と構造解析も行う。
ストマチンの全体構造解明については、膜貫通領域を含む全長タンパク質の構造解析であり、これまでに結晶は得られているが構造解析に成功していない。引き続きタンパク質の調製と結晶化を進める。

Causes of Carryover

計3年間の使用予定額のうち初年度である平成26年度は全体の6割程度の支出を見込んでいたが、次年度以降の物品購入費も同程度支出すると考えられることから、物品購入費を予定より少なく済ませたため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度も平成26年度と同様に研究を進める。平成26年度と同程度、物品購入費に当てる予定である。

  • Research Products

    (7 results)

All 2014 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 3 results) Presentation (3 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Crystal structure of the stomatin operon partner protein from Pyrococcus horikoshii indicates the formation of a multimeric assembly2014

    • Author(s)
      Yokoyama, H., Matsui, I.
    • Journal Title

      FEBS Open Bio

      Volume: 4 Pages: 804-812

    • DOI

      10.1016/j.fob.2014.09.002

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Structures and metal-binding properties of Helicobacter pylori neutrophil-activating protein with a di-nuclear ferroxidase center2014

    • Author(s)
      Yokoyama, H., Fujii, S.
    • Journal Title

      Biomolecules

      Volume: 4 Pages: 600-615

    • DOI

      10.3390/biom4030600

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Structural biology of DNA (6-4) photoproducts formed by ultraviolet radiation and interactions with their binding proteins2014

    • Author(s)
      Yokoyama, H., Mizutani, R.
    • Journal Title

      Int. J. Mol. Sci.

      Volume: 15 Pages: 20321-20338

    • DOI

      10.3390/ijms151120321

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 膜タンパク質ストマチン特異的切断プロテアーゼの構造生物学的研究2014

    • Author(s)
      鈴木佳奈、横山英志、原幸大、松井郁夫、橋本博
    • Organizer
      平成26年度日本結晶学会年会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2014-11-01 – 2014-11-03
  • [Presentation] 膜タンパク質ストマチンのパートナータンパク質の多量体形成2014

    • Author(s)
      横山英志、松井えり子、平本加奈、松井郁夫
    • Organizer
      第87回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2014-10-16 – 2014-10-16
  • [Presentation] 耐熱性ストマチン特異的切断プロテアーゼの構造と機能解析2014

    • Author(s)
      横山英志、小林大介、瀧澤直人、藤井敏、松井郁夫
    • Organizer
      日本生物物理学会第52回年会
    • Place of Presentation
      札幌
    • Year and Date
      2014-09-25 – 2014-09-25
  • [Remarks] 研究紹介

    • URL

      http://w3pharm.u-shizuoka-ken.ac.jp/bukka/yokoyama/index.html

URL: 

Published: 2016-05-27  

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