2015 Fiscal Year Research-status Report
蛍光イメージングによるエンドサイトーシス経路の網羅的解析
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26440067
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| Research Institution | Tokyo University of Technology |
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Principal Investigator |
十島 純子 東京工科大学, 教養学環, 教授 (00431552)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
十島 二朗 東京理科大学, 基礎工学部, 准教授 (00333831)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | エンドサイトーシス / 細胞内輸送 / アクチン / 蛍光イメージング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究で研究代表者は,スクリーニングにより同定した受容体仲介型エンドサイトーシス経路に異常を示す196種類の遺伝子欠損変異体について,表現型に基づいたクラス分けを行い,解析を行っている。H27年度は計画に沿って以下の研究を実施した。
「細胞膜上におけるクラスリン小胞の形成機構」については, 細胞膜から細胞内への取り込みに異常を示したクラスAの変異体の中で,低分子量Gタンパク質Rhoファミリーについての解析を行なった。出芽酵母のRhoファミリータンパク質には、Rho1p～Rho5pおよびCdc42pの6種類が存在するが,この中でRHO3とRHO4遺伝子の二重変異体は致死であり,これらは機能的に相補的に働いていることが示唆されている。本研究においても,Rho3pとRho4pのそれぞれの不活性型変異体（GTP型変異体）では，エンドサイトーシスに著しい遅延がみられた。現在は、Rho3pとRho4pの機能を同時に欠損させた際の影響を調べるために,RHO3遺伝子欠損株のRHO4遺伝子にランダムな変異を導入することで,rho3Δ rho4温度感受性株の作成を行っている。
「クラスリン小胞の初期エンドソームへの輸送の制御機構の解明」については,Srv2/CAPタンパク質の解析を行った。Srv2pはアクチンの重合を制御するタンパク質として知られているが,エンドサイトーシスにおける役割については,不明な点が多い。本年度の研究により,SRV2遺伝子欠損変異体では,アクチンケーブルの形成の阻害や,顕著なエンドサイトーシスの抑制が見られた。また,Srv2がアクチン切断因子であるコフィリンと協調的に働き,エンドサイト－シスにおける細胞膜陥入後のアクチンの脱重合を促進していること, Srv2によるADP/ATP交換の促進がアクチン重合を促進していることを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
酵母細胞を用いた蛍光エンドサイトーシスマーカーによるスクリーニングにより、エンドサイトーシス経路に異常を示す遺伝子欠損変異体の同定に成功した。得られた変異体の表現型に基づく分類ごとの解析を行っており、これらの解析は、研究計画に沿っておおむね順調に進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後も研究計画に沿って、スクリーニングにより同定したエンドサイトーシス経路に異常を示す遺伝子欠損変異体の解析を行う。これまでの解析の結果、いくつかの遺伝子欠損変異体において、他の変異体とは異なる特徴的な表現型が認められた。これらの遺伝子については個別に詳細な解析を進めて行く予定である。また同じクラス分類内で、多重欠損体を作成するなど、遺伝子間の相互作用や機能的な相補性なども解析して行く予定である。これらの解析を通じて、エンドサイトーシス経路で働く、新しいタンパク質ネットワークの同定を目指す。
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| Causes of Carryover |
当初は国内出張を予定していたが、実際は国際学会で発表し、想定していた旅費の予算を超過した。そこで、本年度の出張旅費は、民間の助成金から支出したため、本助成金からの支出に次年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度使用額は、H28年度の物品費として使用する計画である。主に分子生物学実験用試薬やガラス／プラスチック器具などに使用する予定である。
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Research Products
(32 results)
