2015 Fiscal Year Research-status Report
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26440142
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
高田 忍 大阪大学, 理学(系)研究科(研究院), 助教 (40456992)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | シロイヌナズナ / 表皮 / 転写因子 |
Outline of Annual Research Achievements |
(1) ATML1による表皮特異的な転写制御機構をより詳細に理解するために、ATML1の転写後調節に関わるアミノ酸配列の同定をおこなった。まず、ATML1の各ドメインの役割を調べるために、保存された特徴的なアミノ酸配列に変異・欠失を導入し、変異GFP-ATML1タンパク質を胚全体で発現する形質転換植物を作製した。また、変異タンパク質の機能を確認するために、ATML1のプロモーター制御下でも変異タンパク質を発現させ、atml1;pdf2/+変異体に導入した。 (2) ATML1の転写後調節に関わる遺伝子、下流遺伝子を同定するために、ATML1過剰発現体のエンハンサー/サプレッサー変異体のスクリーニングをおこなった。平成26年度までに回収したM2種子を0.15 μMと10 μMのエストラジオール培地上で発芽させ、変異体のスクリーニングをおこなった。低濃度の0.15 μMでも強い過剰発現表現型を示す個体をエンハンサー変異体、高濃度の10 μMでも弱い過剰発現表現型を示す個体をサプレッサー変異体候補とした。現在までに独立な約500系統についてスクリーニングをおこない、13の候補が得られた。 (3) ATML1とACR4の遺伝的な相互作用を明らかにするために、atml1;pdf2胚でACR4の発現パターンの詳細な解析をおこなった。その結果、31.0%の胚でACR4プロモーター活性の低下、66.7%の胚でACR4プロモーター活性の消失が見られた。また、定量的なPCR解析の結果、atml1;pdf2変異体の芽生えでACR4 mRNAの蓄積が減少していることが分かった。これらの結果からATML1とPDF2がACR4の発現に必要であることが示された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成27年度の研究目標は概ね達成できた。また、4回の学会発表をおこない、研究成果の一部を報告することができた。
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Strategy for Future Research Activity |
(1) ATML1タンパク質の転写後調節に関わるドメインの同定 平成27年度に構築した形質転換体を用いて、変異が、GFP-ATML1の位置/組織依存的な核局在に与える影響を調べる。また、発芽後の植物体全体でも発現させ、表皮分化に与える影響を調べる。PCRで遺伝子型を確認するため、4月から10月ごろに遺伝子工学キットやプラスチック消耗品を購入する。
(2) ATML1過剰発現体のエンハンサー/サプレッサー変異体のスクリーニング 平成28年度も引き続きエンハンサー/サプレッサー変異体のスクリーニングを続ける。平成27年度までに得られた変異体候補については、表現型の詳細な観察をおこない、系統の確立を進める。塩基配列の解析や組織学的な観察のために、4月から10月ごろに遺伝子工学キットやプラスチック消耗品、試薬を購入する。
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Causes of Carryover |
平成27年度におこなったエンハンサー/サプレッサー変異体のスクリーニングが予想以上に時間がかかったため、候補変異体の塩基配列の解析や組織学的な観察は次年度におこなうこととした。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
変異タンパク質の過剰発現実験をおこなうため、遺伝子工学キットやプラスチック消耗品を購入する。エンハンサー/サプレッサー変異体のスクリーニングを平成28年度以降にも継続しておこなうため、平成27年度の未使用額をシークエンス解析や組織学的な観察、実験補助員の雇用などの経費に充てたい。
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Research Products
(5 results)