2016 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of post-traslational modification of GAF1 complex in GA signaling
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26440148
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
深澤 壽太郎 広島大学, 理学研究科, 助教 (90385550)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ジベレリン / 信号伝達 / 植物ホルモン / 転写制御 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
GA信号伝達においてDELLAタンパク質は、抑制因子として知られている。DELLAタンパク質は、機能未知の核タンパク質であり下流の信号伝達を抑制している。GA投与によりDELLAタンパク質が速やかに分解され抑制が解除されることでGA応答が誘引される。
DELLAタンパク質の相互作用因子GAF1の単離に成功しDELLAタンパク質が、GAF1と相互作用することによって、下流の標的遺伝子の制御を行っていることを明らかにしてきた。GAF1は、さらにコリプレッサーであるTOPLESS様タンパク質TPRと相互作用することが明らかとなった。DELLAタンパク質はコアクチベーターとして、TPRはコリプレッサーとして機能する。GAは、DELLAの分解を介して、GAF1複合体をアクチベーターからリプレッサーに変換することで、標的遺伝子の発現を調節している。植物体内における、GAF1の翻訳後修飾の有無を検討するため、mycタグを付加したGAF1タンパク質発現する、形質転換植物を作製した。myc抗体を用いたウェスタンブロット解析などより、特定のバンドシフトが検出されることからGAF1タンパク質が植物体内でリン酸化修飾を受けている可能性が示された。GAF1内のリン酸化部位を同定するために、リン酸化予想部位に変異を導入した変異型GAF1を作製しトランジェントアッセイを用いて解析を行なった。リン酸化を受けないGAF1変異タンパク質、リン酸化を模したGAF1変異タンパク質を用いたトランジェント解析では野生型のGAF1に対して異なる転写活性能を示した。これらの解析により、GAF1のリン酸化修飾の候補となる領域を同定した。予想されたリン酸化部位への変異導入したGAF1タンパク質を用いた、トランジェント解析、形質転換体の解析により、GAF1のリン酸化修飾の意義を検証した。
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