2014 Fiscal Year Research-status Report
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26450087
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| Research Institution | Shizuoka University |
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Principal Investigator |
小川 直人 静岡大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (60354031)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 応用微生物 / 細菌 / 発現制御 / トランスポーター / 芳香族化合物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1) 芳香族化合物トランスポーター遺伝子の破壊株作製。B. multivorans ATCC17616株のゲノム上で、安息香酸トランスポーターとして報告があるBenK (Acinetobacter baylyi ADP1株)と相同性が高い、Major Facilitator Superfamilyタイプの3つのトランスポーター様遺伝子benK2, benK3, benK4について、既に作製している単独の遺伝子破壊株に加えて、これらの遺伝子の二重遺伝子破壊株及び三重遺伝子破壊株を作製した。
2) トランスポーター遺伝子破壊株の生育の解析。作製した遺伝子破壊株について、安息香酸、3-クロロ安息香酸各液体培地での生育を解析したところ、各二重遺伝子破壊株では野生株との生育速度の差はほとんど無かった。3-クロロ安息香酸液体培養において、三重遺伝子破壊株では、野生株よりもわずかに生育速度が遅い傾向が見られたが、顕著な差は無かった。これらの結果から、上記3つのトランスポーターに加えて、さらに他のトランスポーターが安息香酸や3-クロロ安息香酸の取り込みに関与している可能性が考えられた。
3) トランスポーター遺伝子の発現解析。野生株について、クエン酸(対照区)、安息香酸、3-クロロ安息香酸をそれぞれ基質として液体培養を行い、benK2, benK3, benK4遺伝子群の発現をReverse-Transcription PCR（半定量）により解析した。その結果、benK2、benK4の2遺伝子は安息香酸での培養の対数増殖期中期、及び、3-クロロ安息香酸での培養の同中期と後期に発現が見られ、これらの基質で誘導発現されることが示唆された。一方、benK3遺伝子は、クエン酸培養区も含めて3種の培養液ともに発現が見られ、構成的に発現することが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成26年度の研究計画の項目はほぼ行い、結果を得ることができた。安息香酸、3-クロロ安息香酸の取り込み関与する可能性が最も高いと予想している3つの遺伝子について、発現様式の相違を明らかにすることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
3つのトランスポーター遺伝子群の発現について、B.multivorans野生株とともに、作製した破壊株も使って、各種の基質による生育時に解析して、役割分担、(遺伝子が破壊された場合の)機能補完について明らかにする。また安息香酸、3-クロロ安息香酸の取り込みに関与する可能性があるさらに他のトランスポーター遺伝子について、ゲノム情報から候補を挙げて、その遺伝子発現を解析すること等により、取り込みへの関与を明らかにしていく。
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Research Products
(1 results)
