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2016 Fiscal Year Research-status Report

ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 26450126
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

廣政 恭明  九州大学, 農学研究院, 准教授 (40291934)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2018-03-31
Keywordsアロステリック効果 / タンパク質の動的構造変化 / 機能制御
Outline of Annual Research Achievements

本研究の中心課題は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体をリン酸化する特異的キナーゼ(PDK)の制御機構の解明を目指し、制御因子がキナーゼに及ぼす動的構造変化の解明を試みるものである。まず、前年度に得られた変異体を用い、PDK2とリガンドの相互作用による動的変化を測定した。その結果、ATPやADPなど基質との相互作用では、C末端領域の運動は限定的なものであったが、ピルビン酸をさらに加えると、運動性が非常に大きくなることが明らかとなった。C末端領域は、基質であるE1タンパク質との相互作用に重要である事から、ピルビン酸/ヌクレオチドによるキナーゼの機能制御と構造変化が密接に関係することが示唆された。また、ミトコンドリア内のREDOX反応により、C末端領域のC384が修飾されることによるPDK2の制御が示唆された(Hurd et al.(2012) J.B.C.)。この点について、化学修飾法並びに数種の変異体を用いREDOX反応による機能制御について検証した。その結果、ヨードアセトアミド(IAA)による修飾はキナーゼの機能に大きな変化を及ぼさなかった。一方、マレイミドなどサイズの大きな修飾基による修飾では、活性が大きく低下した。また、蛍光による動的構造変化においても、マレイミドによりC末端領域の構造運動性が大きくなることが明らかとなった。これらのことから、Cysの修飾はキナーゼの機能に影響を及ぼすことが確認された。一方、Hurdらが提唱したCysのヒドロキシル化によるキナーゼ活性の消失の可能性に対しては、修飾基のサイズから難しいことが示唆された。いずれの結果も、C末端領域とキナーゼの機能制御についての関係を、ドメインの運動性から明らかにした初めての結果である。PDK1については、既に定常光による蛍光解析が終了しており、次年度ではPDK2の測定条件を基礎に動的変化測定を行う予定である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

昨年度に生じた遅れの影響が、本年度に影響し、特にまとめの部分で多く見られた。このため、研究期間を29年度まで、延長し研究のまとめ、ならびに論文発表を行う予定である。

Strategy for Future Research Activity

本年度が、最終年度であり、PDK1とPDK2との比較研究を中心に実施する予定である。また、学会発表や論文発表など、研究のまとめを行う。

Causes of Carryover

論文発表費、学会への出張費において差額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

29年度は最終年度であり、学会発表ならびに論文発表など、研究のまとめを中心に行う。

  • Research Products

    (3 results)

All 2016

All Journal Article (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 1 results,  Open Access: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Characterization and regulation of expression of an antifungal peptide from hemolymph of an insect, Manduca sexta.2016

    • Author(s)
      Al Souhail Q, Hiromasa Y, Rahnamaeian M, Giraldo MC, Takahashi D, Valent B, Vilcinskas A, Kanost MR.
    • Journal Title

      Dev Comp Immunol.

      Volume: 61 Pages: 258-268

    • DOI

      10.1016/j.dci.2016.03.006.

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] Dynamical structural changes of pyruvate dehydrogenase kinase 2 by modification of cysteine2016

    • Author(s)
      海谷京香, 藤野泰寛, 土居克実, 西本悦子, 廣政恭明
    • Organizer
      日本生物物理学会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場
    • Year and Date
      2016-11-25 – 2016-11-27
  • [Presentation] システイン残基修飾によるピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ2の制御2016

    • Author(s)
      海谷京香,藤野泰寛,土居克実,西本悦子,廣政恭明
    • Organizer
      日本農芸化学会西日本支部大会
    • Place of Presentation
      長崎大学
    • Year and Date
      2016-09-15 – 2016-09-16

URL: 

Published: 2018-01-16  

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