2015 Fiscal Year Research-status Report
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26450264
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
河野 智哉 宮崎大学, 農学部, 准教授 (60527547)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 魚類 / Th細胞 / サイトカイン / 発現動態 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成26年度に作製した組換えサイトカインならびに抗フグサイトカイン抗体を用い、フローサイトメーターを用いた細胞内染色技術の構築を行った。まず初めに、抗フグCD4抗体を用いMACS法によって分取したCD4+T細胞(Th細胞)を免疫賦活剤によって刺激し、サイトカインの産生を誘導した。この時、通常であれば分泌型の分子であるサイトカインは細胞外に放出されるが、この阻止技術について検討した。哺乳類で知られるサイトカイン放出阻止剤: Brefeldin Aまたはmomensinについて検討したところ、Brefeldin Aの使用によって、サイトカインの放出が阻止されることを確認した。続いて、当該技術を用い組換えサイトカインを作用させたTh細胞におけるサイトカイン産生パターンを解析した。その結果、前年度の遺伝子レベルでの結果と同様に、1) Th1サイトカインであるIFN-gammaを作用させたTh細胞においては、IFN-gammaの産生が増加し、2) Th2サイトカインであるIL-4/13を作用させたTh細胞においては、IL4/13の産生が増加することが確認された。続いて、産生されたサイトカインがミエロイド系の細胞を活性化するかについて検討した。まず初めに組換えサイトカイン(IFN-gammaおよびIL-4/13)を魚体に接種し、経時的に摘出した食細胞の活性について測定した。その結果、全てのサイトカイン接種区において食細胞の活性酸素の産生能、貪食能およびリゾチーム活性の増強が認められた。さらに、マルチプレックスRT-PCRアッセイによって、同細胞におけるサイトカイン遺伝子の発現を解析した。
IFN-gammaの接種区においては、IL-1beta, TNF-alpha, IL-6などの炎症性サイトカイン遺伝子の発現誘導が認められた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度の組換えサイトカインの作製に続き、抗フグサイトカイン抗体の作製およびフローサイトメーターを用いた細胞内サイトカイン染色技術を構築できたことは高く評価できる。サイトカインによるミエロイド系細胞の活性化の検討については、当初計画と異なる方法で解析した箇所もあるが、概ね研究は計画通りに推進しているものと判断される。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成26～27年度における研究の進展は順調である。このため、次年度も引き続き当初計画に基づいて研究を進める予定である。
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