2014 Fiscal Year Research-status Report
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26450421
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| Research Institution | Iwate University |
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Principal Investigator |
佐藤 れえ子 岩手大学, 農学部, 教授 (80142892)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
御領 政信 岩手大学, 農学部, 教授 (80153774)
小林 沙織 岩手大学, 農学部, 助教 (60566214)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 常染色体優性多発性嚢胞腎 / PKD1遺伝子 / 猫 / ツーヒット / ポリシスチン / CFTR |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１．嚢胞ネットワークによるサンプルの収集
全国各地より遺伝子検索用の血液と、死亡した多発性嚢胞腎症例の腎臓献体を収集した。血液サンプルについては、品種、性別、年齢などの項目と、腹部エコー検査による所見より嚢胞の数ならびに発生場所（両側性か片側性か）（腎臓のみか肝嚢胞を伴うのか）について検索し、PKD1遺伝子検査の結果と合わせて考察を加えた。ネットワークによる嚢胞腎の収集は、来年度以降も継続することとした。遺伝子検査は血液白血球からのPKD1遺伝子診断（PCR-RFLP法）とダイレクトシークエンス法を実施。嚢胞腎の献体については、病理組織学的検査を実施した。
２．多発性嚢胞腎におけるツーヒット仮説の証明
マイクロダイセクションによる嚢胞上皮細胞の採取後DNA抽出を行い、エクソン29に特異的PKD遺伝子プライマーを用いてPCRを実施し、PCR-RFLP法とダイレクトシークエンス法を実施。嚢胞上皮細胞のPKD１遺伝子のc.9891部位のダイレクトシークエンスを実施して、PKD遺伝子変異がヘテロ型（１ヒット）変異か、体細胞変異によるホモ型（２ヒット）変異かを検索した。
３．猫のPKD1遺伝子のc.9891部位以外の変異部位の検索
１で収集したサンプルのうち、PCR-RFLP法で変異が陰性だったにもかかわらず、左右両側の腎臓に多発性の嚢胞を有している症例が少数認められた。この症例サンプルについて、ダイレクトシークエンスを実施し、エクソン29の既知のホットスポット以外に、何らかの変異がないかどうか検索した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
嚢胞ネットワークによるサンプル収集が順調であることと、腎臓の献体も多く集まってきているため。また、サンプルの分析作業（PKD1遺伝子のPCR-RFLP法とダイレクトシークエンス法等）と嚢胞腎に病理組織学的検索と組織化学等の実験が順調であることがあげられる。ツーヒット仮説の証明についても、結果を示すことが出来た。また、嚢胞細胞におけるポリシスチンタンパク発現解析のための抗体もすでに作成できたため、これを利用した嚢胞細胞に対する免疫染色が開始できることがあげられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
１．嚢胞ネットワークによるサンプル収集は続いているため、このPKD1遺伝子のPCR-RFLP法の結果の疫学的分析作業は継続して行う。
２．嚢胞細胞に対するポリシスチンタンパク発現検索を、作成した抗体を用いて実施する。
３．多発性嚢胞腎では嚢胞細胞の増殖と同時に、嚢胞内への嚢胞液輸送が異常亢進している。この原因となっているCFTRタンパク発現について、抗体を作成し嚢胞細胞の免疫染色を実施する。
４．収集した嚢胞腎症例の血液サンプルの中には、腎臓の多発性嚢胞が存在するにもかかわらずPKD1遺伝子のPCR-RFLP法が陰性のものが少数存在する。これらのものではc.9891部位以外の変異部位が存在する可能性があり、エクソン29だけでなく他のエクソンについてもダイレクトシークエンス法により検索する。
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| Causes of Carryover |
繰り越しの額は3000円未満と少額である。理由としては消耗品である物品費が多かったため、旅費を使用できなくなり、少額の余剰が発生したため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
今年度の物品費として使用したい。
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