腸粘膜組織セロトニン量とトリプトファン可用性に着目した犬の炎症性腸疾患の病態解析

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26450424
• Research Institution: Tokyo University of Agriculture and Technology
• Principal Investigator: 井手 香織 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 講師 (40550281)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: セロトニン / 炎症性腸疾患 / 犬 / 慢性腸症

Outline of Annual Research Achievements

消化管粘膜組織におけるセロトニン（5-HT）の産生および除去機構の変化は，ヒトの過敏性腸症候群（IBS）および炎症性腸疾患（IBD）の病態に深く関与している。IBDは犬でも発生が多いものの，重症度や標準的な治療への反応生が症例ごとに様座万であることが小動物臨床における問題となっている。申請者は先行研究において，犬IBDで初めて，消化管の「5-HT環境」に着目した病態解析を行った。5-HTは，アミノ酸であるトリプトファンが材料となりTPH1という酵素の働きによってEC細胞から産生されるが，先行研究の結果，症例犬群では健常犬群に比べて消化管粘膜組織中の5-HT陽性細胞（EC細胞に相当）の数が多く，5-HT産生に働く酵素TPH1の遺伝子mRNA量が少ないことを発見した。これをヒントに平成28年度は，TPH1発現低下によって生じていると考えられるトリプトファン余剰状態が炎症の主役である組織中リンパ球の反応生に与える影響を解析することを計画した。
本試験では，前年度の計画通り確立した手法を用いて犬の十二指腸粘膜組織から分離したリンパ球を用いるが，トリプトファンを添加した条件で犬のリンパ球を初めて培養するにあたり，細胞毒性をはじめとした問題が生じる可能性もあるため，まずは採取が簡単で比較的消化管粘膜組織中リンパ球とポピュレーションが似ている犬の末梢血由来リンパ球を用いて予備実験を行っている。検討項目の1つであるリアルタイムPCR法を用いた各種サイトカインmRNA量の解析に必要な条件検討においては，標的サイトカインに対する既報のプライマー配列に問題を見つけたため，改良作業が必要であった（予想以上に時間がかかったため期間延長承認申請書を提出し，認められた）。この問題は解決できたため，今後，一部終了している予備実験を完了させたのち，本試験へと移行する予定である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

【トリプトファン可用性によるリンパ球の反応生の検討】
犬の消化管粘膜生検組織からリンパ球を分離する手法については，すでに前年度に確立している。しかし「研究実績の概要」に記載したとおり，測定系の予備実験および条件検討に時間を要したため，予定よりも進捗が遅れている。

Strategy for Future Research Activity

平成28年度に計画していた「トリプトファン可用性によるリンパ球の反応生の検討（過剰なトリプトファンが存在するときにリンパ球がどのように反応を示すか）」について，予備実験および条件検討を終了させ，消化管粘膜組織由来のリンパ球を用いた本試験を実施する予定である。

Causes of Carryover

犬の消化管粘膜組織由来リンパ球を用いたトリプトファン可用性に関する研究について，「研究実績の概要」に記載したとおり，当初の予定以上に時間を要し，進捗が遅れたため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

当初は平成28年度に予定していた「犬の消化管粘膜組織由来リンパ球を用いたトリプトファン可用性に関する研究」について，平成29年度への期間延長承認申請書が承認されたため，当該研究を遂行するために使用する。