Etiology of boar spermatozoa affected with summer infertility in an attempt to develop a novel therapy

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26450427
• Research Institution: Gifu University
• Principal Investigator: 村瀬 哲磨 岐阜大学, 応用生物科学部, 教授 (30303514)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 原山 洋 神戸大学, 農学研究科, 教授 (30281140)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: ブタ / 精子 / コレステロール / 重炭酸 / 先体反応 / cAMP / 夏季不妊症 / 再生医療

Outline of Annual Research Achievements

本年度は夏季と冬季にブタ精液を採取し，BTS希釈液で希釈・冷蔵保存中にコレステロールを添加，あるい希釈液の重炭酸を除いた希釈液（BTS-H）で希釈・保存し，精子内cAMP濃度に及ぼす季節の影響及びコレステロールと十炭酸の影響を調べた．
前年度と同様BTS希釈液へのコレステロール添加が及ぼす精子内cAMP含有量へ明らかな影響をは見られなかったが，夏季の精子のcAMP含有量は，冬季に比べ高い傾向が見られた．
BTS-Hで精液を希釈保存した場合においても精子中のcAMP濃度は，BTS希釈液で希釈した場合と大差はなかったが，夏季において高い傾向があった．
cAMP含有量と同様，季節変化を調べる目的で精子内Ca濃度の測定を試みたが，抽出量が不足し，測定されるカルシウム濃度がキットの測定限界以であったため．測定方法を確立できなかった．今後抽出量を増やす方法の検討が必要と思われた．
ブタ精子の先体損傷度を測定するためのPNA染色法に改良の余地があったので，ウシ凍結融解精子をモデルとして方法の検討を行った．その結果，塗抹標本よりバイアル内で染色する方法がよく，透過処理剤であるトライトンの減量ができ，固定時間は3％パラホルムアルデヒドで30分が適していることが明らかとなった．

Research Products

• [Presentation] Modifications of methodology for the staining of frozen-thawed Japanese Black bull sperm acrosomes with fluorescein isothiocyanate peanut agglutinin (FITC-PNA) (2016)
  • Author(s): Reza Rajabi Toustani，Quzi Sharmin Akter，星野洋一郎，向島幸司，坂口慎一，村瀬哲磨
  • Organizer: 第 159 回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 藤沢
  • Year and Date: 2016-09-05 – 2016-09-07
• [Presentation] Summer infertility of boar spermatozoa and its therapy by adipose-derived stem cells and cholesterol (2016)
  • Author(s): Yamamoto, T., Murase, T., Shimizu, K., Koide, A., Kuwahara, Y., Suzuki, S., Matsukawa, Y., Funahashi, Y. and Gotoh, M.
  • Organizer: 18th International Congress on Animal Reproduction
  • Place of Presentation: Tours, France
  • Year and Date: 2016-06-27 – 2016-06-30
  • Int'l Joint Research