2015 Fiscal Year Research-status Report
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26450448
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
松下 操 東海大学, 工学部, 教授 (00165812)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
浅沼 秀樹 国立感染症研究所, インフルエンザウイルス研究センター, 室長 (40333570)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ニワトリ血清タンパク質 / アミノ酸配列 / 精製 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究代表者はニワトリ血清中よりグループBのスカベンジャー受容体システインリッチ(SRCR)ドメインを有する新規タンパク質(CS120)を発見した。本研究はCS120の構造と機能の解明を目的とし、2015年度は以下の研究成果を得た。
(1) 2014年度は、CS120の全アミノ酸配列を明らかにする目的でニワトリ肝臓cDNAを鋳型にしてPCRを行い、約2.5bpのPCR産物を得て、これをクローニングした結果、約1600塩基の配列を決定した。これをアミノ酸に翻訳すると複数のグループBのSRCRドメインを持つことが判明した。2015年度はcDNAクローニングを継続して行い、2014年度に得られたCS120の内部配列よりも5’側と3’側の塩基配列を解析した。その結果、CS120の全アミノ酸配列を決定し、CS120が8個のグループBのSRCRドメインから構成されることが判明した。
(2) CS120の精製方法として、2014年度はCS120と類似構造を持つニワトリ卵白タンパク質のEW135に対する抗体カラムを用いたアフィニティクロマトグラフィー法を開発した。本法は簡便で特異的にCS120が精製できる。しかし、この方法では収率が低いという問題点があった。そこで、2015年度は抗体カラムに取って代わるCS120の精製方法を検討した。その結果、CS120はプロテインAカラムを用いて精製できることが判明した。
(3)2014年度の検討ではインフルエンザウイルスに対するCS120の効果は見られなかった。2015年度は条件を変えてインフルエンザウイルスに対するCS120の効果を検討した。インフルエンザウイルスとCS120 を混合してMDCK細胞に加えて培養し、形成するプラーク数を調べたところ、やはり対照群と比較して顕著な減少は見られなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
目標としていたCS120の全アミノ酸配列をcDNAクローニングにより決定した。また、ニワトリ血清中のCS120の新たな精製法を見いだした。
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| Strategy for Future Research Activity |
CS120cDNAのコーディング領域の塩基配列は明らかになったが、3'側の非翻訳領域の配列は完全には解明されていないので、この領域の構造を明らかにする。新たな精製法を用いてCS120を精製し、その機能の解明を目指す。
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| Causes of Carryover |
2015年度までに得られた研究成果を2016年度に国際学会で発表、また雑誌に投稿することにし、それらの費用に当てる為に助成金を残した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
助成金は主に消耗品の購入に使用する。また、国際学会（International Veterinary Immunology Symposium)と論文投稿（投稿料と別刷り代）の費用にも当てる予定である。
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Research Products
(3 results)
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[Journal Article] CTRP6 is an endogenous complement regulator that can effectively treat induced arthritis.2015
Author(s)
Murayama A.M, Kakuta S, Inoue A, Umeda N, Yonezawa T, Maruhashi T, Tateishi K, Ishigame H, Yabe R, Ikeda S, Seno A, Chi H-H, Hashiguchi Y, Kurata R, Tada T, Kubo S, Sato N, Liu Y, Hattori M, Saijo S, Matsushita M, Fujita T, Sumida T, Iwakura Y
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 6
Pages: 1-12
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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