2015 Fiscal Year Research-status Report
パーキンソン病原因遺伝子DJ-1が関与する尿酸合成系路の解明
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26450465
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Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
Principal Investigator |
天竺桂 弘子 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 講師 (80434190)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坊農 秀雅 大学共同利用機関法人情報・システム研究機構, (新領域融合研究センター及びライフサイエンス統合データベースセンター, 准教授 (20364789)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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Keywords | 酸化ストレス / miRNA / RNA-seq / 定量RT-PCR / B.mori / 変異体 / ポジショナルクローニング |
Outline of Annual Research Achievements |
カイコガ(Bombyx mori)の幼虫には油蚕(あぶらこ)と呼ばれている尿酸代謝に異常を持つ変異体が存在する。申請者はライフサイエンス統合データベースセンターの坊農博士を中心とするグループとの共同研究により、新型シーケンサーで解読したカイコガ変異体 opおよび野生型の全ゲノム配列および各組織におけるRNA-seq解析データの解析を引き続き行った。ところが、得られたゲノム配列、RNA-seqデータの比較解析では野生型と変異体の違いを見いだすことが出来なかった。これまでに様々な配列解析の手法を用いて解析を行っていたが、opの原因遺伝子を同定できずにいた。
そこで、本年度はカイコmiRNAの公共データベースから得られたデータを新たに解析に加えた。その結果、ポジショナルクローニングで絞り込んだ原因遺伝子候補領域に存在するmiRNAを見出した。現在この候補に関して定量RT-PCRおよびルシフェラーゼアッセイ等を用いた解析により、更なる原因遺伝子の絞り込みを行っている。
また、先の研究によりMicroarray解析で同定した尿酸合成経路を調節すると思われる遺伝子群についてもRNAiにより尿酸合成との関連を調査する目的で機能解析を継続している。来年度末頃には、これらの経路について最終的なデータを得られる予定である。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまでに目標であった、原因遺伝子候補を同定できつつあるため。
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Strategy for Future Research Activity |
平成28年度は得られた候補カイコmiRNAについて詳細にその機能を解析することを目標とする。現在この候補に関して定量RT-PCRおよびルシフェラーゼによる標的配列結合アッセイ等を用いた解析により、更なる原因遺伝子の絞り込みと、その標的遺伝子の探索を行っている。具体的には、RNA-seqでopにおいて発現が低下した遺伝子群を抽出し、miRNAの標的配列と結合する遺伝子を抽出し、実験により確定する。
また、先の研究によりMicroarray解析で同定した尿酸合成経路を調節すると思われる遺伝子群についてもRNAiにより尿酸合成との関連を調査する目的で機能解析を継続している。最終年度はこれらのデータを総合し、尿酸経路の全貌解明にむけたデータを得られる予定である。
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Causes of Carryover |
年度末まで原因遺伝子が特定できず、旅費やデータ解析用のアプリケーションを購入しなかったため。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
未使用額は次年度物品費に組み込み計画通りに全て使用する。
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Research Products
(13 results)
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[Journal Article] Mapping and recombination analysis of two moth colour mutations, Black moth and Wild wing spot, in the silkworm Bombyx mori.2016
Author(s)
Ito K, Katsuma S, Kuwazaki S, Jouraku A, Fujimoto T, Sahara K, Yasukochi Y, Yamamoto K, Tabunoki H, Yokoyama T, Kadono-Okuda K, Shimada T.
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Journal Title
Heredity (Edinb).
Volume: 116(1)
Pages: 52-59
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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