2014 Fiscal Year Research-status Report
イオン液体を利用した遺伝子リポプレックスの固形製剤化に関する研究
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26460048
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| Research Institution | Hoshi University |
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Principal Investigator |
米持 悦生 星薬科大学, 薬学部, 教授 (40201090)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | コレステロール誘導体 / 正電荷リポプレックス / 正電荷ナノプレックス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
siRNA の構造的・静電的性質を利用したリポソーム/siRNA 複合体（リポプレ ックス）は、siRNAのDDS として注目されている。これまでの調製方法では、リポプレックスの形成効率が悪く、さらに、siRNA の熱および分解酵素に対する不安定性は改善できない。これまでに、正電荷コレステロール誘導体を用いた脂質ナノ粒子製剤を開発し、siRNAを効率よくがん細胞に導入できることを報告しているが、siRNAが効果を十分発揮するためには、ナノ粒子製剤がエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれた後に、細胞質へ効率よく放出される必要がある。
本年度は、合成 siRNA との複合体形成が容易かつ、目的組織への移行性、細胞内遊離性を改善可能な新規な添加剤として、エンドソームからの放出を促進するプロトンスポンジ効果を有し、合成が容易な正電荷コレステロール誘導体を設計し、これを用いて調製した正電荷ナノ粒子、正電荷リポソームのがん細胞へのsiRNA導入効率について検討を行った。siRNAによる遺伝子発現抑制効果においては、OH-NC-を結合させたコレステロール誘導体で調製した脂質微粒子リポプレックスが、他の製剤よりも高い遺伝子発現抑制効果を誘導した。さらに、リポプレックス製剤の保存安定性の改善を目的とした凍結乾燥を視野に入れ、適用可能なイオン液体のスクリーニングを行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コレステロール誘導体は、OH-, OH-C-, OH-NC-の3種類を合成し、界面活性剤、正電荷脂質を添加し、脂質ナノ粒子、リポソームを作成した。さらに、siRNAと様々な比率で混合し、正電荷ナノプレックス、リポプレックスを調整した。
各製剤の細胞内取り込み量と遺伝子発現抑制効果を評価したところ、OH-NC-Cholでは、高い遺伝子発現抑制効果が確認された。
凍結乾燥製剤化に使用可能なアミノ酸と有機酸の組み合わせについて、スクリーニングを行ったが、最適な組成は決定できていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究で、調製された正電荷ナノプレックス、リポプレックスの各成分の処方最適化を行う。微粒子製剤の構造について、Ｘ線散乱等の測定により物性評価を進める。
最適化された微粒子製剤について、in vivo での効果を検討する。
凍結乾燥製剤化のための、凍結保護剤として用いるアミノ酸の有機酸の組み合わせ熱分析等で評価し、イオン液体の組成を検討する。
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| Causes of Carryover |
消耗品の価格が想定より若干安かったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度予算とともに消耗品の購入に充てる予定。
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