2015 Fiscal Year Research-status Report
慢性蕁麻疹病態における好塩基球と血液凝固反応の役割解明
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26460097
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
柳瀬 雄輝 広島大学, 医歯薬保健学研究院(医), 助教 (40452586)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 慢性蕁麻疹 / 血液凝固 / 血管内皮細胞 / 単球 / 肥満細胞 / 好塩基球 / 組織因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、慢性蕁麻疹病態における好塩基球と血液凝固系の関わりを明らかにするため、血管内での好塩基球の活性化から蕁麻疹の発症までを「A. 好塩基球活性化による単球・血管内皮細胞のTF発現と血液凝固系の駆動」「B. TFまたは産生された活性化凝固因子の血管外への漏出」と「C.血管外に漏出した活性化凝固因子によるマスト細胞等の免疫担当細胞の活性化」の3つの段階に分け、下記の手法によりそれぞれの過程を明らかにすることで、好塩基球活性化を引き金とする新しい慢性蕁麻疹発症モデルを確立することを目的とする。27年度は、当初の計画通り、単球・血管内皮細胞に発現したＴＦが血漿成分の血管外漏出に寄与するかどうか検討した。26年度報告の通り、単球はLPS等のTLRリガンドによりTFの発現を増加され、また、血管内皮細胞はLPSとヒスタミン（好塩基球由来のものでも）によって相乗的にTFの発現が増加される。本年度は、これらの細胞に発現したTFが、外因系凝固反応を駆動し、その結果、血管透過性亢進が誘導されるかどうかを、血管内皮細胞の蛍光染色解析、及び細胞の接着状態を無標識・リアルタイムにモニタリングできるインピーダンス法により評価した。その結果、LPS・ヒスタミン等の刺激により発現した単球・血管内皮細胞上のTFは、外因系血液凝固反応を強く駆動し、さらに、凝固反応により産生された活性化血液凝固因子は血管内皮細胞上のPAR1を介して血管透過性の亢進を誘導し、血漿成分の漏出に寄与する可能性を明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画書通り、27年度までに「A. 好塩基球活性化による単球・血管内皮細胞のTF発現と血液凝固系の駆動」「B. TFまたは産生された活性化凝固因子の血管外への漏出」機構を解明した。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度は、計画通り、血管外に漏出した活性化凝固因子によるマスト細胞等の免疫担当細胞の活性化について検討する。血管外に漏出した活性化凝固因子によるマスト細胞等の免疫担当細胞の活性化については、TF発現によって産生された活性化凝固因子が、マスト細胞上のPARに結合し、マスト細胞を活性することは十分に考えられる。そのため、本研究では、ヒト皮膚由来マスト細胞における各種PAR受容体（PAR1-4）の発現を確認するため、mRNA発現量、タンパク発現量、膜発現量をそれぞれPT-PCR法・ウェスタンブロット法、フローサイトメトリー法により確認する。ヒト皮膚由来マスト細胞におけるPARの発現が確認された後、活性化凝固因子FIIa、FXa、FIIaをマスト細胞活性化候補物質とし、皮膚切片及び、ヒト皮膚から単離したマスト細胞（human primary mast cell; HPMC）を使用して、これらの物質のHPMCに対する活性化、並びその至適条件を検討する。また、それぞれの活性化凝固因子が、どのPAR（1-4）に作用してマスト細胞を活性化するのか明らかにする。さらにそれぞれの凝固因子で刺激した際のヒスタミン遊離以外の機能（細胞遊走、炎症性サイトカイン産生等）についても確認する。
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| Causes of Carryover |
28年度計画の研究に当初の計画よりも予算が多く必要だと判断した。また、最終年度に研究成果発表の場を多く設けるため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
旅費・消耗品等に使用
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